【摘 要】
：
胰腺癌（PC）是一种高度恶性的、死亡率越来越高的肿瘤,其五年生存率仅为4%。绝大部分患者确诊后已经处于肿瘤晚期阶段,且转移明显,不适合手术治疗。N6-甲基腺苷（m6A）RNA甲基化修饰是最常见的转录后表观遗传化学修饰,越来越多的研究证明m6ARNA甲基化调节因子在许多癌症中过度表达,并通过对m6A的动态调节参与癌症的发展。然而m6ARNA甲基化作为治疗靶点仍不甚清楚。本研究旨在分析验证吉西他滨与m
论文部分内容阅读
胰腺癌（PC）是一种高度恶性的、死亡率越来越高的肿瘤,其五年生存率仅为4%。绝大部分患者确诊后已经处于肿瘤晚期阶段,且转移明显,不适合手术治疗。N6-甲基腺苷（m6A）RNA甲基化修饰是最常见的转录后表观遗传化学修饰,越来越多的研究证明m6ARNA甲基化调节因子在许多癌症中过度表达,并通过对m6A的动态调节参与癌症的发展。然而m6ARNA甲基化作为治疗靶点仍不甚清楚。本研究旨在分析验证吉西他滨与m6A甲基化修饰之间的作用关系,用吉西他滨处理胰腺癌细胞后,通过检测m6A甲基化修饰水平、m6A甲基化相关调节子表达变化验证吉西他滨对m6A甲基化修饰的调节,探讨m6A作为吉西他滨治疗靶点抑制胰腺癌进展的作用机制。目的:探讨吉西他滨作为胰腺癌化疗药与m6A甲基化修饰水平的关系;通过检测吉西他滨处理后的胰腺癌细胞中m6A甲基化调节子的表达变化,确定吉西他滨抑制胰腺癌进展的m6A靶标;细胞功能实验验证靶标调节子对胰腺癌细胞增殖和迁移能力的影响;筛选受吉西他滨/WTAP调控的发生m6A修饰的下游靶基因;裸鼠体内实验验证吉西他滨对胰腺癌细胞成瘤能力及m6A甲基化修饰的影响。方法:①通过CCK-8、Transwell、EdU等实验检测吉西他滨对胰腺癌细胞增殖和迁移能力的影响;②用10ug/mL的吉西他滨处理胰腺癌细胞为实验组,未经吉西他滨处理的胰腺癌细胞设置为对照组,运用m6A 比色法定量试剂盒检测两组中m6A甲基化修饰水平,比较m6A水平的表达变化,并通过qRT-PCR检测比较m6A调节因子（Writers、Erasers和Readers）的表达变化。结合TCGA、GEO数据库分析m6A调节子表达差异性;③验证吉西他滨处理后m6A调节子蛋白表达水平,敲低靶调节子表达水平,通过细胞功能实验验证调节子对胰腺癌细胞增殖迁移能力的影响;④m6A2Target网站预测WTAP下游可能的靶基因,结合WTAP-IP和m6A-IP进行验证,肿瘤标本进行免疫荧光染色分析,检测上下游基因表达及其相关性;⑤预测并验证可能识别MYC上m6A修饰的阅读蛋白,确定m6A-MYC的上下游通路;⑥将对数生长期的5*106个胰腺癌细胞注入裸鼠一侧腋下皮下组织,成瘤后随机分为两组,PBS组和吉西他滨治疗组,吉西他滨治疗组小鼠将吉西他滨以50mg/kg浓度经腹腔注射入小鼠体内,五天一次,PBS组小鼠以同样方法剂量注射PBS,观察肿瘤生长速度、总体生存状态;⑦4周后处死小鼠,提取蛋白及石蜡包埋切片,通过免疫荧光、qRT-PCR等检测WTAP和MYC表达变化。结果:①与CCK-8和EdU检测发现吉西他滨处理显著降低了胰腺癌细胞的增殖能力,Transwell分析发现吉西他滨抑制了胰腺癌细胞的迁移能力;②吉西他滨抑制胰腺癌m6A修饰水平,且多个m6A甲基化修饰相关因子出现不同程度的表达变化,其中WTAP表达显着降低（FC=0.37,P＜0.001）,ALKBH5呈上升趋势（FC=1.6,P＜0.05）,TCGA和GEO数据分析发现胰腺癌中m6A相关蛋白出现不同程度的表达增加或降低,且WTAP在胰腺癌中上调,KEGG和GO富集分析显示与WTAP相关的差异基因可富集于细胞因子、代谢、内环境稳态等生物进程,结合实验和数据库我们认为WTAP为吉西他滨靶基因;③吉西他滨抑制WTAP蛋白表达水平,且WTAP敲低显著降低了胰腺癌细胞增殖迁移能力;④qRT-PCR验证发现,WTAP敲低后,靶基因MYC、HER2分别出现0.25倍和0.34倍下调,CDKN2A上调了 1.86倍。WTAP-IP及m6A-IP分析显示MYC被显著富集。胰腺癌标本免疫荧光分析发现WTAP和MYC共表达趋势显著;⑤吉西他滨也可以降低阅读蛋白IGF2BP1的表达,并且敲低了 IGF2BP1表达后,MYC稳定性也确实被抑制,K-M生存分析显示IGF2BP1越高预示着越差的生存时间;⑥吉西他滨治疗组的小鼠肿瘤生长速度,肿瘤大小和质量均小于PBS组;⑦qRT-PCR及免疫荧光分析发现吉西他滨显著抑制了 WTAP及MYC的表达。结论:我们的研究证实吉西他滨干扰胰腺癌中WTAP蛋白表达,从而降低MYC上m6A修饰以及MYC mRNA的稳定性,经由IGF2BP1识别后调节MYC蛋白表达,进而抑制MYC下游通路,起到抗胰腺癌进展的作用。
其他文献
有机电致发光器件在数字终端显示和固态平板发光等领域有着巨大的应用前景。本文中,我们选用卤化亚铜（包含氯化亚铜、溴化亚铜、碘化亚铜）作为配位金属,与邻菲罗啉单膦（2-Phen P）、二苯并呋喃双膦（DBFDP）、二苯并噻吩双膦（DBTDP）进行配位;同时我们用咔唑及叔丁基咔唑对二苯并呋喃进一步修饰,合成3,6-双咔唑-二苯并呋喃双膦（DCz DBFDP）及3,6-双叔丁基咔唑-二苯并呋喃双膦（Dt
蛋白激酶在真核生物体内参与调控多种生理活动。拟南芥基因组中有10个ASKs（Arabidopsis SHAGGY-related protein kinases）,属于 Shaggy 类激酶,其激酶催化结构域和果蝇 SGG（SHAGGY protein kinase）以及人源 GSK3β（glycogen synthase kinase 3β）蛋白激酶高度保守,相似性高达70%。ASKs由N端调控
第一部分能谱CT多参数分析预测磨玻璃结节肺腺癌浸润性的诊断效能目的:探讨能谱CT多参数分析评估磨玻璃结节（ground-glass nodule,GGN）样肺腺癌浸润性的可行性。方法:收集2018年5月至2021年3月在本院行胸部能谱CT平扫及增强扫描且术后病理证实为肺腺癌的GGN患者资料。最终入组98例病例,以术后病理为标准分为以下两组:前驱腺体病变/微浸润腺癌（minimally invasi
目的:通过对基底节区脑出血患者术后连续的神经功能评价指标及脑水肿体积等资料进行统计分析,对比神经内镜经额入路锁孔手术与显微镜经颞入路锁孔手术治疗基底节区脑出血的疗效。方法:回顾性分析2017年1月至2021年6月苏州大学附属第二医院神经外科手术治疗的166例基底节区脑出血患者的临床资料。其中神经内镜经额入路锁孔手术患者81例（神经内镜组）,显微镜经颞入路锁孔手术患者85例（显微镜组）。分别统计分析
铂类配合物是治疗多种恶性肿瘤的重要化疗制剂,它们可单独使用也可与其他药物或治疗方法联用。顺铂、卡铂、奥沙利铂是全球公认可用于临床癌症治疗的铂类化疗药物。然而,这些药物的毒副作用（如肾毒性、肝损伤、神经毒性等）以及肿瘤细胞的耐药性已成为其临床使用的一个严重问题。另外,铂类配合物的水溶性差以及它们在肿瘤细胞和正常细胞之间的选择性低,大大降低了它们的治疗效果。为了克服这些问题,研究人员正尝试开发低毒、高
生物钟节律失调已被证明是现代社会中肥胖、心血管失常等疾病的重要诱因之一。参与维持生物钟的因素有很多,其中光是其中最为重要的一个,但相关作用机制尚未得到充分阐明。Rhodopsin,即视紫红质,是视网膜上视杆细胞中的一种感光蛋白,参与暗光下的视觉形成。前期研究发现其在多种模式生物中均节律性表达。Rhodopsin在无脊椎动物果蝇（Drosophila melanogaster）中能直接参与生物钟调节
自然语言生成（Natural Language Generation,NLG）是自然语言处理领域中应用非常广泛的任务,目的是生成人类可读的自然语言,其中代表性的应用包括机器翻译、文本自动摘要和对话系统生成等。近年来,神经网络的兴起大大提高了文本生成模型的性能。然而,作为一种数据驱动的方法,神经网络模型的性能严重依赖于训练数据的质量和规模,即使训练集含有少量的噪声也会降低模型生成文本的能力。因此,在
随着自然教育蓬勃发展，自然保护地属性的植物园作为非正式学习场域，逐渐受到国内学者关注。相比学校课堂教学模式、教学方法的实践与理论研究，我国植物园开展自然教育学习设计的实践研究处于探索阶段。文章依托植物园内的专类植物与教育设施，设计制作植物主题自然教育学习单，探究其应用效果，结果发现，公众使用学习单后可增长植物知识、加强自然联结、引发学习兴趣、促进人际交往、提高重游与推荐专类园的意愿，达成多种教育成
兴趣点（Points of Interest,POI）推荐从用户的历史足迹中挖掘个人的潜在偏好,帮助人们在信息过载的时代快速筛选符合自身兴趣的POI。然而,随着人们所处场景的变化,他们的需求也在动态变化着。这就需要一个能够满足用户在不同时空下需求的个性化推荐模型。但是用户在访问自己活跃区域以外的地方时,可能会因为想体验当地风情而去访问与其本地偏好不一致的POI,这被称为异地用户的兴趣漂移现象。同时
研究背景:近年来多项研究发现睡眠障碍与脑卒中之间存在密切关系,睡眠障碍是脑卒中的独立危险因素之一,同时卒中后睡眠障碍不利于患者康复。目前,睡眠呼吸暂停与脑卒中之间的关系已被多项队列研究所证实,而内源性昼夜节律与脑卒中之间的关系尚不明确。本研究旨在观察急性缺血性卒中患者的睡眠-觉醒昼夜节律特点,评估昼夜节律对急性缺血性卒中患者神经功能以及认知、情绪、生活质量及预后的影响。研究方法:纳入2019年10