【摘 要】
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弓形虫是一种寄生于有核细胞内的原虫。弓形虫病是一种重要的人畜共患寄生原虫病,可感染所有温血动物和人类,可在全球范围内流行分布。近些年来,有相关报道,在一些经济发展较落后文化发展程度较低的山区,仍有捕食野生动物的陋习,因野生动物食物来源具有多样性,所以相比较圈养动物而言,其感染病毒、细菌和寄生虫的风险较高,人类一旦误食感染弓形虫的阳性组织则会引起人弓形虫病。目前,我国对圈养家禽牲畜弓形虫病的治疗和防
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弓形虫是一种寄生于有核细胞内的原虫。弓形虫病是一种重要的人畜共患寄生原虫病,可感染所有温血动物和人类,可在全球范围内流行分布。近些年来,有相关报道,在一些经济发展较落后文化发展程度较低的山区,仍有捕食野生动物的陋习,因野生动物食物来源具有多样性,所以相比较圈养动物而言,其感染病毒、细菌和寄生虫的风险较高,人类一旦误食感染弓形虫的阳性组织则会引起人弓形虫病。目前,我国对圈养家禽牲畜弓形虫病的治疗和防控已经具有成熟治疗体系和防控措施,但是对野生物种感染弓形虫后宿主差异变化的基因及可作为诊断弓形虫感染的靶标基因的研究十分不清楚,这严重制约着野生物种感染弓形虫病的分子诊断技术的开发及应用。本文拟选取人工繁育果子狸替代野生物种,取果子狸慢性感染弓形虫后的脑组织进行转录组测序并结合生物信息学分析,获取弓形虫慢性感染果子狸的差异表达基因谱,筛选与免疫调节相关的基因。（1）分析得出2808个差异基因,其中上调的差异基因为860个,下调的差异基因为1948个,GO分析显示细胞过程和催化活性为最多的生物学过程。KEGG分析筛选出相关基因富集程度较高的免疫调节通路。（2）结合生物信息学对测得的差异基因进行深度挖掘以分析并筛选显著表达的基因,筛选出10个有关免疫调节代谢通路中显著表达的差异基因分别是CCL5、CCL8、CCL23、CASP8、TLR1、TLR4、STAT1、ROS1、NOS1和NOS2。（3）采集呈弓形虫阳性的野生动物脑组织,运用PCR-RFLP技术对其进行基因分型,结果为蝙蝠（Toxo DB#19、Toxo DB#66、Toxo DB#1）,竹鼠（Toxo DB#1、Toxo DB#111）,雉鸡（Toxo DB#2）,刺猬（Toxo DB#111、Toxo DB#1、Toxo DB#52）和褐家鼠（Toxo DB#10）。（4）对感染弓形虫的野生动物分别取脑组织,以每个物种对应的差异基因的引物序列为模板,进行q RT-PCR验证其表达趋势,结果显示CCL5、TLR1基因在五种弓形虫阳性的野生动物中均为上调趋势,CCL8基因在感染弓形虫的蝙蝠、刺猬、褐家鼠特定物种间呈上调趋势,NOS2基因在蝙蝠、刺猬、雉鸡特定物种间呈下调趋势,ROS1在刺猬、竹鼠、褐家鼠、雉鸡特定物种中均为下调表达趋势。从实验结果可以说明CCL5、TLR1、CCL8、NOS2、ROS1这五个差异表达基因可以作为野生动物感染弓形虫后的基因检测靶标。
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