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目的:初步探讨脂联素对血管内皮细胞炎症反应的影响及其机制。方法:培养人脐静脉内皮细胞株(HUVEC),按照随机化原则分组:①正常对照组;②TNF-α损伤组:每组HUVEC分别加入不同浓度的TNF-α(0、10、20、50ng/ml)刺激6h;③TNF-α+ PDTC组:不同浓度的PDTC(10、50、100μmol/L)预处理HUVEC 1h,再加入TNF-a,浓度为20ng/ml,继续培养6h;④TNF-α+脂联素组:不同浓度的脂联素(12.5、25、50μg/ml),培养HUVEC 16h,再加入TNF-a,浓度为10ng/ml,继续培养6h。采用双抗体夹心ABC-ELISA法检测细胞上清MCP-1浓度。结果:HUVEC与不同浓度的TNF-a共同孵育6h后其MCP-1的表达水平明显高于对照组(P<0.01);HUVEC首先经不同浓度的PDTC预处理1h,然后再与TNF-a(20ng/ml)共同孵育6h,与单纯TNF-a刺激组相比,其MCP-1的表达水平明显降低(P<0.01)。HUVEC首先经不同浓度的脂联素预处理16h后再与TNF-a(10ng/ml)共同孵育6h,与单纯TNF-a刺激组相比,低浓度(12.5μg/ml)脂联素不能抑制TNF-a介导的内皮细胞MCP-1表达(P>0.05),当脂联素的浓度达到25μg /ml时,脂联素可明显的抑制TNF-a介导的内皮细胞MCP-1表达(P<0.01)。结论:脂联素可以通过抑制血管内皮细胞某些炎症因子的表达水平来改善血管内皮的炎症反应状态,从而发挥其抗炎抗动脉粥样硬化作用。第二部分2型糖尿病大鼠血清脂联素水平的研究目的:探讨血清脂联素水平与2型糖尿病的关系。方法:清洁级健康雄性Wistar大鼠,平均体重为206.35±12.48g,随机分为正常对照组和糖尿病组,普通饲料适应性喂养2周后,正常组大鼠继续给予普通饲料喂养,糖尿病组大鼠则给予含3%胆固醇的高脂饲料喂养。4周后,糖尿病组大鼠按30mg/kg单次腹腔注射链脲佐菌素,72小时后尾静脉采血测血糖,以血糖浓度>16.7mmol/L作为2型糖尿病模型诊断标准。高脂高胆固醇饲料继续喂养12周后结束实验。ELISA法检测大鼠血清脂联素及血清sICAM-1水平;免疫比浊法检测血清CRP水平;化学法检测血脂水平。结果:糖尿病组大鼠与正常对照组大鼠相比,血糖、TC、TG、LDL-C、CRP及sICAM-1水平显著升高(P<0.05);HDL-C水平显著降低(P<0.05)。提示高脂高胆固醇饮食联合小剂量STZ建立的2型糖尿病模型存在明显的高血糖、血脂代谢紊乱及高炎症反应状态。相关性分析显示血清脂联素水平与TC、TG、LDL-C及CRP负相关(P<0.05);与HDL-C正相关(P<0.05);与血清sICAM-1无明显相关性(P>0.05)。提示循环低脂联素水平与动脉粥样硬化密切相关。结论:糖尿病大鼠血清脂联素水平显著低于正常大鼠,低脂联素血症与2型糖尿病特别是糖尿病大血管病变的发生发展密切相关。第三部分脂联素对糖尿病大鼠动脉粥样硬化早期阶段的干预研究目的:探讨提高血浆脂联素浓度能否改善糖尿病大鼠动脉粥样硬化早期阶段的炎症反应。方法:采用AdEasyTM系统构建表达人全长脂联素蛋白的重组腺病毒载体。重组腺病毒进行鉴定、扩增后,测定病毒滴度。高脂高胆固醇喂养联合小剂量STZ建立2型糖尿病大鼠模型,随机分为2组:(1)糖尿病组:糖尿病大鼠给予高脂高胆固醇饲料喂养16周;(2)脂联素干预组:糖尿病大鼠给予高脂高胆固醇喂养14周后,尾静脉注射表达人脂联素的重组腺病毒载体,病毒滴度为2×108 pfu,继续高脂高胆固醇喂养2周。ELISA法检测血浆脂联素及细胞间黏附分子水平;免疫比浊法测定血清C-反应蛋白水平;RT-PCR及实时荧光定量PCR法检测大鼠主动脉组织MCP-1、ICAM-1及VCAM-1的mRNA表达水平;化学发检测血脂及血糖水平。结果:高脂高胆固醇联合小剂量STZ法成功建立2型糖尿病动物模型,其血糖、TC及TG水平分别达到7.46±1.73mmol/L、206.88±28.62mg/dL及65.52±18.59mg/dL ,显著高于正常大鼠(P<0.05)。尾静脉注射表达脂联素的重组腺病毒14天后,血清人脂联素水平达到68.4±19.2μg/mL,而糖尿病组大鼠血清没有检测出人脂联素蛋白。但脂联素干预组与糖尿病组相比,血糖、血脂水平没有显著性差异(P>0.05)。脂联素干预组血清可溶性细胞间黏附分子和C-反应蛋白水平与糖尿病组相比较,分别下降22%和21%,差异具有显著性(P<0.01)。RT-PCR及实时荧光定量PCR检测显示脂联素干预组大鼠主动脉组织MCP-1、ICAM-1及VCAM-1 mRNA表达水平均明显低于糖尿病组(P<0.05)。结论:提高血浆脂联素水平可明显抑制糖尿病大鼠体内炎症反应,提示脂联素具有抗炎活性及抑制糖尿病大鼠动脉粥样硬化的发生发展。