苓桂术甘汤药效物质基础研究

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本研究首先以常用中药材茯苓为研究对象,收集了26个不同产地的茯苓样品,对其进行质量评价方法的研究。对茯苓中有效成分去氢土莫酸进行提取分离和结构鉴定,自制了定量用对照品;采用反相高效液相色谱法,用ODS柱,以甲醇-乙腈-2%冰醋酸水溶液(13:12:10,v/v)为流动相,丙酸睾丸素为内标,于242nm处检测,测定了26个茯苓样品中去氢土莫酸的含量;结果表明:去氢土莫酸在0.0152~0.304mg·mL-1范围内线性关系良好,相关系数为0.9991,平均回收率为99.9%,为评价茯苓质量提供了一个定量依据;采用反相高效液相色谱法,对茯苓的95%乙醇提取物,主要为四环三萜类有机酸进行色谱指纹图谱的分析,实现了对其中29个化学成分色谱峰的分离,获取了反映该药材化学成分信息的化学数据;将所获得的化学数据进行化学模式识别研究:用系统聚类分析将茯苓样品按质量分为优质品、一般品和劣品三个等级,所得结果与形态学鉴定结果一致;用逐步判别分析进行特征变量抽提,结果表明:从29个变量简化为8个变量,再进行系统聚类分析时所得分类结果一致;采用欧氏距离法进行相似度计算,根据相似度数值的接近程度分类,结果表明:用29个变量和8个变量参加分类,所得结果与系统聚类分析结果基本一致,对未知样品进行识别时,只需将该样品进行高效液相色谱测定获取化学成分信息,并将所获化学成分信息输入计算机,即可对其真伪和优劣作出评价。 以张仲景《伤寒论》治痰饮名方苓桂术甘汤为研究对象,选择抗氯仿致心律失常和抗异丙肾上腺素致心肌缺血两项药理指标,以水和不同浓度乙醇为提取溶剂,根据其不同提取物的药理实验结果,确定95%乙醇为最佳提取溶剂;采用正交试验设计对方中组成药味进行药味与药量同时加减拆方,对所得16个处方分别进行药理实验;采用直观分析、方差分析、逐步回归分析(SREG)与典型相关分析(CCOR)将所得药理数据和处方组成相关联,探讨复方中药苓桂术甘汤的配伍机制,确证了方中以茯苓为君,以桂枝为臣,佐以白术,使以甘草的配伍关系,与该复方中药的传统诠释相一致,并确定最佳方为原方;同时对各处方进行HPLC色谱指纹图谱研究,将所得药理数据和各指纹峰的峰面积相关 沈阳药科大学博士学位论文 摘要联,探讨复方中药菩桂术甘汤的药效物质基础;通过回归分析和相关分析从50个色谱峰中选取17个有效色谱峰,它们是与药效密切相关的有效成分群,并确定其质量控制指标为君药获菩中的去氢土莫酸、臣药桂枝中的桂皮酸和使药甘草中的甘草酸。 本研究对苔桂术甘汤进行了提取工艺与质量控制方法研究。采用正交试验设计法,以去氢土莫酸、桂皮酸和甘草酸含量与浸膏重量为考察指标,对提取溶剂量、提取时间和提取次数三个因素进行优化,确定最佳提取工艺为:加 10倍量95%乙醇,回流提取3次,每次60 min;采用薄层色谱法对该制剂中桂枝、白术和甘草三味中药材进行定性鉴别,斑点清晰,重现性好;采用高效液相色谱法对该制剂中去氢土莫酸、桂皮酸和甘草酸进行定量测定,线性范围分别为 9*-180* pg·mL”’(r-0.9998),8.4-168*卜g·mL‘(r-0.9999),19.4~388.0 pg·mL”‘(r二0.9999);回收率分别 为 97.8%(RSD二2*%),98·2%(RSD二1.9O),98.3o(RSD二2.4O)。为苔桂术甘汤质量控帘方法提供定性、定量分析依据。 张仲景用菩桂术甘汤治疗阳虚水饮所致短气、心胸满闷、气上冲胸、起则头眩等症,后世医家扩而广之,用以治疗胸痹心痛,本研究主要对该方的抗心肌缺血与抗心律失常作用进行了研究。实验表明:菩桂术甘汤能明显延长小鼠在常压缺氧条件下的存活时间;缓解异丙肾上腺素、垂体后叶素所致的大鼠急性心肌缺血,增强缺血心肌的超氧化物歧化酶侣OD)活性,降低心肌丙二醛(MDA)含量;含药血清可显著增加离体豚鼠心脏的冠脉流量和心搏振幅;明显减少经硝基四氮咆(N-BT)染色所显示的梗塞区;可显著增加麻醉犬的冠脉流量,降低冠脉阻力和外周阻力,改善心肌的供血供氧;降低心率、氧利用率、耗氧指数,从而降低心肌耗氧量;降低收缩压、左室末期收缩压、降低心脏前负荷,增加心脏血液灌流量。菩桂术甘汤对氯仿所致小鼠室颤有明显保护作用;能对抗氯化钙、氯化钡、肾上腺素所致的心律失常;并能够降低成年大鼠300七、100沾。30沾、3七四个切变率下的全血粘度、全血还原粘度、红细胞聚集指数。红细胞刚性指数、红细胞电泳时间;对血沉、血浆粘度、红细胞压积、红细胞计数没有明显影响。菩桂术甘汤能显著抑制胶原蛋白一肾上腺素诱发小鼠体内血栓形成;并能显著抑制花生四烯酸诱导的家兔血小板聚集。综上所述,菩桂术甘汤具有较强的抗心肌缺血及抗心律失常作用,并有较强的抗血小板聚集的作用。为菩桂术甘汤的临床应 2 沈阳药科大学博士学位论文 摘要_用提供依据。 建立了测定血浆中去氢土莫酸和桂?
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