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目的:以人口腔癌KB细胞为研究对象,研究二甲双胍对人口腔癌KB细胞体外增殖及凋亡的影响,并探讨二甲双胍对细胞影响的初步作用机制。方法:1.细胞经二甲双胍处理24 h后,在倒置显微镜下观察KB细胞生长和形态学的变化。MTT法检测细胞存活率,平板克隆观察二甲双胍对口腔癌细胞体外克隆形成能力的影响;2.KB细胞分组处理后,采用线粒体膜电位检测试剂盒检测细胞内线粒体膜电位的变化情况;Annexin V-FITC/PI染色方法检测二甲双胍对KB细胞凋亡的影响;Western blot检测二甲双胍对KB细胞内Mcl-1,Bim,Bax及caspase-3蛋白的影响;3.cDNA Mcl-1上调Mcl-1后,MTT,JC-1观察上调Mcl-1二甲双胍对KB细胞增殖及凋亡的影响;Western blot法检测口腔癌细胞中Mcl-1,Bim,Bax及caspase-3蛋白表达的变化;4.qRT-PCR检测二甲双胍处理KB细胞后miR-26a表达水平的变化;5.转染miR-26a后,集落克隆实验和PI单染实验分别用于检测KB细胞过表达miR-26a后,二甲双胍对转染mir-26a的KB细胞体外增殖及凋亡的影响是否发生变化,随后,再用蛋白印迹法检测Mcl-1表达的变化。结果:1.不同浓度的二甲双胍对人口腔癌KB细胞体外增殖及凋亡的影响1)形态学结果显示,经不同浓度二甲双胍处理后,KB细胞可出现形态变圆,体积缩小,部分细胞发生边集并破裂成细胞碎片等显著的形态学变化。随着二甲双胍浓度的增加贴壁细胞数目逐渐减少,漂浮细胞逐渐增多;2)MTT细胞活力检测结果显示,二甲双胍可降低人口腔癌KB细胞的活力。与对照组相比,二甲双胍处理组的细胞活力明显降低,并呈现药物浓度和时间依赖的关系;3)平板克隆形成实验显示二甲双胍可显著抑制kb细胞的克隆形成能力;4)annexinv-fitc/pi染色显示二甲双胍能诱导细胞发生凋亡,并呈浓度依赖性。5)jc-1荧光检测,红绿荧光的相对比例降低,提示线粒体膜电位下降;6)westernblot结果表明二甲双胍能显著下调口腔癌细胞中mcl-1的表达,上调bim、bax的表达水平,并诱导caspase-3的活化。2.过表达mcl-1能够降低口腔癌kb细胞对二甲双胍的敏感性1)cdnamcl-1转染效率的检测将cdnamcl-1和空质粒转染进入口腔癌细胞kb中,westernblot结果显示转染cdnamcl-1组中mcl-1表达明显升高;2)cdnamcl-1转染降低口腔癌细胞对二甲双胍的敏感性mtt结果显示转染cdnamcl-1后kb细胞的存活率较未转染细胞明显提高,提示cdnamcl-1降低了kb细胞对二甲双胍的敏感性;jc-1结果显示转染cdnamcl-1能抑制二甲双胍引起的线粒体膜电位的下降。westernblot表明mcl-1的高表达抑制了kb细胞在二甲双胍作用下细胞内bax及bim蛋白的表达和caspase-3的活性。3.二甲双胍对kb细胞mir-26a的调节及mir-26a对细胞增殖凋亡的影响1)与对照组相比,二甲双胍可明显上调细胞中mir-26a的表达水平;2)用mir-26a的模拟物和抑制物分别转染kb细胞,结果显示,转染mir-26a模拟物后,与二甲双胍单独处理组相比较,kb细胞的增殖受到明显抑制,而mir-26a的抑制物则出现相反的结果。进一步试验发现,mir-26a的模拟物转染kb细胞后,mcl-1水平明显降低,且细胞凋亡率明显增加。结论:1.二甲双胍能显著抑制kb细胞的增殖并且诱导细胞凋亡;2.上调mcl-1后能降低口腔癌kb细胞对二甲双胍的敏感性;3.二甲双胍刺激口腔癌KB细胞后上调miR-26a的表达;4.二甲双胍对口腔癌增殖及凋亡的影响可能与二甲双胍上调miR-26a表达有关。