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目的：本课题主要研究复元胶囊通过抑制Ⅱ型胶原-盘状结构域受体2（type Ⅱcollagen-discoidin domain receptor2,COLⅡ-DDR2）在骨关节炎（osteoarthritis，OA）关节软骨中的表达而影响软骨细胞肥厚分化的机制。通过培养大鼠肋软骨原代细胞，构建重组质粒载体并转染软骨细胞，检测不同DDR2表达情况下软骨细胞肥厚标志物基质金属蛋白酶13（matrix metalloproteinases13，MMP13）、Ⅹ型胶原（type Ⅹcollagen,COLⅩ）、碱性磷酸酶（alkaline phosphatase，ALP）的mRNA及蛋白表达情况；研究在p38、MEK信号转导通路抑制剂的作用下，软骨细胞内肥厚相关蛋白的表达情况、复元胶囊含药血清对COLⅡ-DDR2引起的肥厚软骨细胞模型表达目标蛋白的影响。以此探讨COLⅡ-DDR2对软骨细胞肥厚分化的影响、DDR2细胞内信号转导和下游分子效应、复元胶囊对软骨细胞肥厚的作用，为OA的发病机制寻找实验依据，以及为OA的药物干预提供参考。方法：1.按照mankens评分标准，选取重庆医科大学附属第一医院关节置换病人关节软骨，对OA早期标本进行HE及免疫组化染色，确定COLⅡ、DDR2在OA患者关节内是否表达；采用实时定量聚合酶链反应（Real-time PCR）、蛋白免疫印迹（Western-blot）检测DDR2的mRNA和蛋白在OA软骨的表达。2.大鼠肋软骨细胞培养、鉴定，用Ⅱ型胶原诱导DDR2表达上调，构建含有全长DDR2基因（Full lengthe DDR2,FD）及仅含有细胞外结构（discoidin domain,DS）基因的克隆载体,转化大肠杆菌成功后进行蓝白斑筛选，挑选菌落酶切并连接表达质粒载体，转染软骨细胞。3.转染成功后用Ⅱ型胶原诱导肥厚软骨细胞模型，并检测相应的肥厚markers，即ALP、MMP13、COLⅩ的mRNA和蛋白的表达。4.采用p38通路抑制剂SB203580和MEK通路抑制剂PD98059、Wnt信号通路抑制剂Dkk1孵育软骨细胞后，检测肥厚markers的表达。5.软骨细胞分为5组，分别用复元胶囊含药血清、壮骨关节丸含药血清、空白血清进行干预，模型组细胞用Ⅱ型胶原诱导后不加干预，阴性对照组则不进行任何干预，各组检测相应肥厚markers的表达，结果进行统计学分析并得出研究结论。结果：1.免疫组合染色显示OA早期患者关节软骨即有COLⅡ、DDR2表达，软骨细胞HE染色可见软骨细胞增生、肥厚及凋亡现象，切片上可见软骨细胞肥厚的典型改变为“静止层-增生层-肥厚层-软骨下骨层”。2.目的基因和原核克隆载体pGEM-T连接后转化DH5α感受态细胞，携带目的基因的重组质粒在大肠杆菌中克隆，蓝白斑筛选得到纯化的重组子并和真核表达载体pcDNA3.1(+)连接，构建完成后成功转染细胞。转染后的软骨细胞经胶原诱导后获得肥厚软骨细胞模型。3.采用RT-PCR及WT检测软骨细胞肥厚标志物mRNA及蛋白表达，PCR及WT结果均显示：转染FD组﹥模型组﹥转染DS组﹥未经胶原干预组，结果有统计学意义（p﹤0.05）。4. SB203580、PD98059以及Dkk1和软骨细胞孵育后，采用Ⅱ型胶原诱导软骨细胞，提取mRNA及总蛋白进行目标基因及蛋白表达测定，结果显示MEK通路抑制剂PD98059对软骨细胞肥厚markers表达无明显作用，p38通路抑制剂SB203580和Wnt信号通路抑制剂Dkk1均对软骨细胞肥厚markers表达有不同程度影响，其中Dkk1对细胞表达肥厚markers有显著影响，经过数据处理，结果显示差别具有统计学意义（p﹤0.05）。5.复元胶囊及壮骨关节丸给药后获取大鼠含药血清，软骨细胞经Ⅱ型胶原诱导后与之共同孵育，检测细胞肥厚相关基因和蛋白的表达。结果显示复元胶囊大中剂量组均对目标蛋白表达有明显的抑制作用，且大中剂量组之间无显著性差异，复元胶囊小剂量组对目标蛋白表达无明显抑制作用。差别具有统计学意义（p﹤0.05）。结论：DDR2在OA早期表达，COLⅡ-DDR2能够促进软骨细胞早期肥厚分化，使用Wnt信号通路抑制剂能显著减弱这种作用，说明COLⅡ-DDR2细胞内信号传递可能和Wnt通路有关；复元胶囊能够抑制软骨细胞肥厚分化，其作用机理可能和抑制DDR2活化有关。