研究目的与健康人群相比,通过高通量测序分析慢性萎缩性胃炎患者外周血白细胞的mRNA和miRNA表达水平,以及外周血清中循环miRNA的表达水平,尝试探究传统中医定义的脾气虚证和脾胃湿热证可能的生物学基础。研究方法于北京中医药大学东方医院经过一系列诊断标准、纳入标准和排除标准筛选后,招募健康人5例,慢性萎缩性胃炎脾气虚证患者5例和慢性萎缩性胃炎脾胃湿热证患者5例。对以上三组共15例受试者采集的外周血进行白细胞和血清的分离。然后提取白细胞和血清的总RNA进行高通量测序。以健康人为对照组,对两个证型组测序获得的白细胞和血清miRNA和mRNA/gene分别进行差异表达的筛选。利用数据库对已知的差异miRNA进行靶基因预测,分析两个证型组各自特有的白细胞差异miRNA和血清差异miRNA的预测靶基因的KEGG通路和GO生物学功能。探究同一证型下白细胞和血清中共有的差异miRNA靶基因的功能。构建证型特有的差异miRNA-差异gene关系网络。研究结果在患者白细胞中,与健康人组比较,脾胃湿热证组共筛选出24个证型特有的差异miRNA和145个证型特有的差异基因;而脾气虚证组共筛选出66个证型特有的差异miRNA和155个证型特有的差异基因。KEGG结果显示,脾胃湿热证组白细胞差异miRNA参与了细胞外基质受体相互作用通路,而脾气虚证组特有的白细胞差异miRNA除了参与细胞外基质受体相互作用通路外还与脂肪酸生物合成、Hippo信号转导等通路有关。脾胃湿热证组白细胞差异基因则与五羟色胺和谷氨酸能神经突触相关,脾气虚证组白细胞差异基因与细胞外基质受体相互作用,MAPK信号转导和脂肪酸代谢等通路相关。GO功能分析结果显示,脾胃湿热证组特有的白细胞差异miRNA与凋亡的负调控有关而脾气虚证组特有的白细胞差异miRNA与TRK受体信号转导、大分子复合物组装、细胞蛋白修饰过程和小分子代谢过程等生物过程相关。此外,这两个证型组特有的白细胞差异miRNA均涉及到基因表达、细胞死亡、分解代谢以及细胞蛋白修饰等过程。脾胃湿热证特有的白细胞差异基因则参与了免疫和固有免疫反应生物过程,脾气虚证组则主要与炎症反应、胶原分解代谢和细胞外基质的组织过程相关。在患者血清中,与健康人组比较,脾胃湿热证组共筛选出37个证型特有的差异miRNA;而脾气虚证组共筛选出84个证型特有的差异miRNA。KEGG结果显示,脾胃湿热证组和脾气虚证组各自特有的血清差异miRNA都与脂肪酸生物合成、赖氨酸降解和癌症中的蛋白多糖有关。此外,脾胃湿热证组血清差异miRNA更多参与了癌症相关的其他通路,而脾气虚证组血清差异miRNA则与脂肪酸代谢、foxO信号转导、p53信号转导和癌症的转录失调等通路密切相关。然而GO功能分析结果显示,血清中证型特有的miRNA与白细胞中证型特有的miRNA靶基因所富集到的生物学过程存在证型一致性。构建的证型特有的差异miRNA-gene关系网络结果表明,脾胃湿热证组特有的白细胞差异miRNA调控的差异靶基因与代谢过程相关,脾气虚证组特有的白细胞差异miRNA调控的差异靶基因主要与免疫、癌症和代谢过程有关。脾气虚证患者的白细胞和血清中均出现了差异表达的hsa-miR-122-5p,而脾胃湿热证患者的白细胞和血清中没有共有的差异表达miRNA。hsa-miR-122-5p的预测靶基因中有5个在白细胞中差异表达,包括JAG2,SH3RF1,MYOF,PCSK6和COL4A2。KEGG分析hsa-miR-122-5p调控的靶基因主要与各种癌症通路和PI3K-Akt信号通路相关。结论慢性萎缩性胃炎脾胃湿热证患者和脾气虚证患者外周血中白细胞和血清的差异miRNA均与代谢相关,可能是中医上讲的脾虚和脾胃功能失调的潜在生物学基础。两种证型的患者白细胞和血清的差异miRNA还与癌症相关,也证实了慢性萎缩性胃炎是胃癌前病变的一种表现。此外,脾气虚证患者白细胞的差异miRNA和差异基因更多与免疫,细胞间的粘附联接和通讯有关,可能反映了患者白细胞功能和特性的改变。尤其是脾气虚证患者的白细胞和血清中均有高水平差异表达的hsa-miR-122-5p,且该miRNA与多种癌症、免疫相关,我们推测它可能是慢性萎缩性胃炎脾气虚证潜在的生物标志物。但有待进一步证实研究。