非酒精性脂肪肝病是一种常见的慢性肝病,其发病机制复杂,当前尚缺乏理想的治疗手段。益生菌具有广泛的生理功能,其抗氧化、调节肠道菌群以及增强机体免疫力的功能更是成为研究热点。本研究利用大鼠非酒精性脂肪肝病模型,采用蛋白组学的方法对益生菌干预的非酒精性脂肪肝病模型大鼠进行肝脏蛋白质组差异分析,结合生物信息学分析鼠李糖乳杆菌LV108发酵乳缓解非酒精性脂肪肝病中起到调控作用的关键差异蛋白点及重要通路,研究其缓解非酒精性脂肪肝病的作用机制。主要研究结果如下:1.鼠李糖乳杆菌LV108发酵乳对大鼠非酒精性脂肪肝病的保护效应研究。40只SPF级SD雄性大鼠通过高脂饮食建立脂质过氧化损伤模型,随机分成空白组、模型组、鼠李糖乳杆菌LV108发酵乳组和混合发酵乳组。空白组给予普通饲料,模型组、LV108发酵乳组和混合发酵乳组均给予高脂饲料饲养,同时两组益生菌干预组分别灌胃LV108发酵乳和混合发酵乳(1.0mL/100g,109CFU/mL)。观察益生菌发酵乳对肝功能、肝内脏脂肪堆积以及脂质过氧化损伤状态,评价益生菌发酵乳对非酒精性脂肪肝病的保护效应。结果表明,各组间大鼠饲料消耗无显著性差异,第4周后LV108发酵乳组及其混合发酵乳组体重增量显著低于模型组。大鼠血清指标表明LV108发酵乳组及其混合发酵乳干预能够降低血清甘油三酯、总胆固醇和低密度脂蛋白胆固醇水平,提高高密度脂蛋白胆固醇含量。大鼠肝脏氧化指标可以看出,LV108发酵乳组及其混合发酵乳干预能够提高抗氧化酶超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化氢酶、过氧化氢酶的活力和非酶抗氧化物质谷胱甘肽的含量,清除超氧阴离子自由基、羟自由基、一氧化氮自由基等自由基,减少脂质过氧化物丙二醛的含量。说明LV108发酵乳组及其混合发酵乳通过降低高脂饲料的食物效应比,缓解脂质堆积,调控血脂及肝脏脂质氧化损伤对大鼠对非酒精性脂肪肝病发挥保护作用。2.鼠李糖乳杆菌LV108发酵乳对大鼠非酒精性脂肪肝病的调控作用。应用串联质谱标签法结合液相二级质谱技术,分析了空白组(N)、模型组(M)和鼠李糖乳杆菌LV108发酵乳组(A)大鼠肝脏蛋白表达的变化。同时选择了 2个差异表达蛋白进行平行反应监测分析,以进一步验证质谱的结果。通过生物信息学分析进一步筛选出在LV108发酵乳缓解非酒精性脂肪肝病中起到调控作用的关键差异蛋白点,并探索益生菌对非酒精性脂肪肝病的作用机制。结果表明,在大鼠肝脏中共鉴定到蛋白质4155个,其中比较组A/M组的上调差异表达蛋白质有16个,下调差异表达蛋白质10个。通过平行反应监测对2个重要差异蛋白双功能凋亡调节子和细胞色素C进行定量分析,结果发现模型组中双功能凋亡调节子的表达量与空白组相比显著上调,而LV108发酵乳组中的表达量与模型组相比下调。此外,LV108发酵乳组中细胞色素C的表达量与模型组相比显著下调。模型组中细胞色素C的表达量与空白组相比没有显著变化。这与质谱分析的结果表现一致,进一步验证了质谱分析的准确性。差异表达蛋白质聚类分析也发现筛选所得的差异表达蛋白质可以有效的把模型组与空白组以及LV108发酵乳组与模型组分开,说明差异表达蛋白质筛选的合理性。GO功能注释发现,比较组A/M中差异表达的26个蛋白按其注释分为生物学过程,细胞组分和分子功能。最主要的生物过程是单细胞过程;最主要的细胞成分位于细胞部分,细胞和细胞内;最主要的分子功能是结合。同时细胞色素C引起的凋亡过程中涉及的半胱氨酸类内肽酶活性的激活等重要生物学过程,半胱天冬酶结合等分子功能,BRCA1-A复合体等定位蛋白质,发生了显著性变化。KEGG通路富集分析发现比较组M/N的差异表达蛋白质共富集到143条其中40条重要通路发生了显著性变化,提示这些通路可能参与了非酒精性脂肪肝病的形成。比较组A/M的差异表达蛋白质共富集到37条KEGCG通路,其中苯丙氨酸,酪氨酸和色氨酸的生物合成和硫代谢这两条重要通路发生了显著变化。共有17条通路被比较组A/M和M/N的差异表达蛋白质共同富集到。LV108发酵乳通过调控非酒精性脂肪肝病通路及细胞凋亡等多个通路上的关键蛋白点来抑制肝细胞凋亡,缓解肝脏损伤。LV108发酵乳还通过调控多种氨基酸的合成与代谢、糖酵解/糖异生、过氧化物酶体及P53信号通路等信号通路上多个关键蛋白点,改善高脂饮食诱导的脂肪变性,恢复脂质代谢平衡。此外,蛋白质相互作用网络分析发现在比较组A/M中磷酸甘油酸激酶与3-磷酸甘油醛脱氢酶以及蛋白质SDA1同系物和Surfeit 6的相互作用。LV108发酵乳对核糖体以及蛋白质的合成具有促进作用,其对糖酵解途径的影响也将成为后续研究在重点。LV108发酵乳通过调控与细胞亡和脂质代谢有关重要的差异蛋白,抑制细胞凋亡,并恢复脂质代谢平衡,进而缓解大鼠非酒精性脂肪肝病。