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目的：
近年来高毒力肺炎克雷伯菌（hypervirulentKlebsiellapneumoniae,hvkp）在各地区的报道不断增加，但尚无中国广东地区的流行病学研究。本研究比较广东地区高毒力肺炎克雷伯菌（hypervirulentKlebsiellapneumoniae,hvkp）和典型肺炎克雷伯菌（classicKlebsiellapneumoniae,ckp）的临床特征、耐药性、分子流行病学特点及相关毒力情况，以分析hvkp的生物学特征。
方法：
2016年11月到2018年4月，从广东省四家医院收集多种标本来源的肺炎克雷伯菌。应用Vietk全自动微生物分析仪对所有菌株进行鉴定。收集感染患者的临床资料。拉丝试验检测高黏液表型，肉汤稀释法检测药物敏感性；应用多位点序列分型(MLST)技术对肺炎克雷伯菌进行序列分型，并用eBURSTv3.0软件绘制populationsnapshot图，获得克隆复合群（Clonalcomplex,CC）；采用PCR法检测细菌的荚膜血清型(K1、K2、K5、K20、K54、K57)和相关毒力基因(rmpA、rmpA2、magA、iucA等)。采用蜡螟分析肺炎克雷伯菌的毒力，计算蜡螟的半数致死率（LD50）。采用SPSS19.0统计软件进行统计学分析。
结果：
本研究共收集了194株肺炎克雷伯菌，其中血标本来源136株（70.1%），其他标本来源58株（29.9%）。hvkp的阳性率为40.2%（78/194），其标本主要来自血液（57.7%）,ckp菌株的标本也主要来自血液（78.4%）。hvkp中肝脓肿和急性腹膜炎的阳性率高于ckp（P＜0.05）。hvkp对亚胺培南、阿米卡星、头孢呋辛、头孢曲松、头孢吡肟和环丙沙星的耐药率显著低于ckp,hvkp中发现一株产ESBL的菌株。hvkp中主要的ST型为ST23（18/78,23.1%）、ST65（13/78,16.7%）、ST86（9/78,11.5%），该3种ST型占hvkp总数的51.3%；进一步做eBURST聚类分析，hvkp的主要克隆复合群为CC23（22/77,28.6%）、CC65（20/77,26.0%）和CC86（9/77,11.7%）。主要的ST型为ST11（18/116,15.5%）、ST15（6/116,5.2%）、ST37（5/116,4.3%）和ST147（4/116,3.4%），这4种ST型占总的ckp的比例仅为28.4%（28/116），其余菌株的ST型多为1-2株，分型呈多样性；ckp的主要克隆复合群为CC11（21/108,19.4%）和CC37（10/108,9.3%）。毒力基因rmpA、iucA、iroB、fimH等在hvkp菌株中的阳性率高于ckp，差异有统计学意义（P＜0.05）。hvkp中iroB+/fimH+的阳性率最高（80.8%）,iucA+/iroB+/fimH+的阳性率为74.4%（58/78）。血清型K1中entB+/fimH+/ycfM+、entB+/fimH+/iroB+和iucA+/iroB+/fimH+的阳性率分别为100%、96.2%和92.3%。血清型K2中entB+/fimH+/ycfM+、entB+/fimH+/iroB+和iucA+/iroB+/fimH+的阳性率分别为81.8%、81.8%和78.8%。蜡螟实验结果表明高黏液表型组（hm+）、高黏液表型合并iucA+/iroB+/fimH+阳性组（hm+/iucA+/iroB+/fimH+）、iucA+/iroB+/fimH+阳性组的LD50均为5.4±0.7（log10cfu/ml）,P＞0.05，差异无统计学意义。血清型K1的LD50高于血清型K2（5.9±0.3（log10cfu/ml）vs5.4±0.6（log10cfu/ml）,P=0.000）。血清型K1中的毒力基因entB+/fimH+/ycfM+、entB+/fimH+/iroB+或iucA+/iroB+/fimH+阳性菌株的LD50高于血清型K2中这3组毒力基因阳性的菌株（前者LD50均为5.9±0.3（log10cfu/ml），后者的LD50均为5.4±0.6（log10cfu/ml）,P=0.000）。
结论：
1.hvkp与ckp均主要来自血液，广东地区hvkp的阳性率和我国其他地区差别不大。
2.hvkp和ckp的序列分型（ST型）分布呈现不同的特点，hvkp菌株的ST型相对较为集中，以ST23和ST65为主。ckp中的ST型呈多样性。
3.hvkp中多数毒力基因的阳性率高于ckp,iucA+/iroB+/fimH+的阳性率较高，血清型K1和K2中entB+/fimH+/ycfM+、entB+/fimH+/iroB+或iucA+/iroB+/fimH+菌株的阳性率较高（78.8%-100%）。
4.蜡螟LD50实验显示，hmkp组、hmkp合并仅iucA+/iroB+/fimH+阳性组、iucA+/iroB+/fimH+阳性组间的毒力无区别。血清型K1的毒力弱于K2。血清型K1中的毒力基因entB+/fimH+/ycfM+、entB+/fimH+/iroB+和iucA+/iroB+/fimH+阳性的菌株的毒力弱于血清型K2中这3组毒力基因阳性的菌株。提示，拉丝试验阳性定义hvkp是简单和较准确的标准。在后续研究中也应重视iucA+/iroB+/fimH+阳性的菌株。
近年来高毒力肺炎克雷伯菌（hypervirulentKlebsiellapneumoniae,hvkp）在各地区的报道不断增加，但尚无中国广东地区的流行病学研究。本研究比较广东地区高毒力肺炎克雷伯菌（hypervirulentKlebsiellapneumoniae,hvkp）和典型肺炎克雷伯菌（classicKlebsiellapneumoniae,ckp）的临床特征、耐药性、分子流行病学特点及相关毒力情况，以分析hvkp的生物学特征。
方法：
2016年11月到2018年4月，从广东省四家医院收集多种标本来源的肺炎克雷伯菌。应用Vietk全自动微生物分析仪对所有菌株进行鉴定。收集感染患者的临床资料。拉丝试验检测高黏液表型，肉汤稀释法检测药物敏感性；应用多位点序列分型(MLST)技术对肺炎克雷伯菌进行序列分型，并用eBURSTv3.0软件绘制populationsnapshot图，获得克隆复合群（Clonalcomplex,CC）；采用PCR法检测细菌的荚膜血清型(K1、K2、K5、K20、K54、K57)和相关毒力基因(rmpA、rmpA2、magA、iucA等)。采用蜡螟分析肺炎克雷伯菌的毒力，计算蜡螟的半数致死率（LD50）。采用SPSS19.0统计软件进行统计学分析。
结果：
本研究共收集了194株肺炎克雷伯菌，其中血标本来源136株（70.1%），其他标本来源58株（29.9%）。hvkp的阳性率为40.2%（78/194），其标本主要来自血液（57.7%）,ckp菌株的标本也主要来自血液（78.4%）。hvkp中肝脓肿和急性腹膜炎的阳性率高于ckp（P＜0.05）。hvkp对亚胺培南、阿米卡星、头孢呋辛、头孢曲松、头孢吡肟和环丙沙星的耐药率显著低于ckp,hvkp中发现一株产ESBL的菌株。hvkp中主要的ST型为ST23（18/78,23.1%）、ST65（13/78,16.7%）、ST86（9/78,11.5%），该3种ST型占hvkp总数的51.3%；进一步做eBURST聚类分析，hvkp的主要克隆复合群为CC23（22/77,28.6%）、CC65（20/77,26.0%）和CC86（9/77,11.7%）。主要的ST型为ST11（18/116,15.5%）、ST15（6/116,5.2%）、ST37（5/116,4.3%）和ST147（4/116,3.4%），这4种ST型占总的ckp的比例仅为28.4%（28/116），其余菌株的ST型多为1-2株，分型呈多样性；ckp的主要克隆复合群为CC11（21/108,19.4%）和CC37（10/108,9.3%）。毒力基因rmpA、iucA、iroB、fimH等在hvkp菌株中的阳性率高于ckp，差异有统计学意义（P＜0.05）。hvkp中iroB+/fimH+的阳性率最高（80.8%）,iucA+/iroB+/fimH+的阳性率为74.4%（58/78）。血清型K1中entB+/fimH+/ycfM+、entB+/fimH+/iroB+和iucA+/iroB+/fimH+的阳性率分别为100%、96.2%和92.3%。血清型K2中entB+/fimH+/ycfM+、entB+/fimH+/iroB+和iucA+/iroB+/fimH+的阳性率分别为81.8%、81.8%和78.8%。蜡螟实验结果表明高黏液表型组（hm+）、高黏液表型合并iucA+/iroB+/fimH+阳性组（hm+/iucA+/iroB+/fimH+）、iucA+/iroB+/fimH+阳性组的LD50均为5.4±0.7（log10cfu/ml）,P＞0.05，差异无统计学意义。血清型K1的LD50高于血清型K2（5.9±0.3（log10cfu/ml）vs5.4±0.6（log10cfu/ml）,P=0.000）。血清型K1中的毒力基因entB+/fimH+/ycfM+、entB+/fimH+/iroB+或iucA+/iroB+/fimH+阳性菌株的LD50高于血清型K2中这3组毒力基因阳性的菌株（前者LD50均为5.9±0.3（log10cfu/ml），后者的LD50均为5.4±0.6（log10cfu/ml）,P=0.000）。
结论：
1.hvkp与ckp均主要来自血液，广东地区hvkp的阳性率和我国其他地区差别不大。
2.hvkp和ckp的序列分型（ST型）分布呈现不同的特点，hvkp菌株的ST型相对较为集中，以ST23和ST65为主。ckp中的ST型呈多样性。
3.hvkp中多数毒力基因的阳性率高于ckp,iucA+/iroB+/fimH+的阳性率较高，血清型K1和K2中entB+/fimH+/ycfM+、entB+/fimH+/iroB+或iucA+/iroB+/fimH+菌株的阳性率较高（78.8%-100%）。
4.蜡螟LD50实验显示，hmkp组、hmkp合并仅iucA+/iroB+/fimH+阳性组、iucA+/iroB+/fimH+阳性组间的毒力无区别。血清型K1的毒力弱于K2。血清型K1中的毒力基因entB+/fimH+/ycfM+、entB+/fimH+/iroB+和iucA+/iroB+/fimH+阳性的菌株的毒力弱于血清型K2中这3组毒力基因阳性的菌株。提示，拉丝试验阳性定义hvkp是简单和较准确的标准。在后续研究中也应重视iucA+/iroB+/fimH+阳性的菌株。