我们前期在研究茶树对假眼小绿叶蝉取食其叶片的应答反应中,从抗假眼小绿叶蝉的茶树品种——凫早2号中分离出一个受假眼小绿叶蝉取食诱导的基因,该基因的编码序列与其他物种中核糖体失活蛋白的编码序列高度相似,因此我们将该基因命名为CsRIPI (Ribosome inactivating proteins),核糖体失活蛋白是一类能够使核糖体失活进而抑制蛋白质的合成的毒素,在植物中广泛存在。研究表明,核糖体失活蛋白具有抗病毒,抗真菌,抗肿瘤等多种生物学功能,因此,它成为当前生物学研究的热点课题之一。在本研究中,首先,通过农杆菌介导的遗传转化,将CsRIPI基因插入到烟草植株中,共获得了21株含有外源基因——CsRIPI基因的烟草转基因植株,经过PCR鉴定,结果表明其中有15株为阳性植株。其次,我们利用实时荧光定量PCR法,对部分To代阳性转基因烟草植株中插入的外源CsRIPI基因的拷贝数进行了鉴定；结果表明,选取的6个T0代阳性CsRIPI转基因植株中,有1个T0代转基因植株中外源基因CsRIPI为单拷贝插入,有4个To代转基因植株为两个拷贝插入,有1个T0代转基因植株为三个拷贝插入。再次,通过汁液摩擦法,用烟草花叶病毒对T1代转基因植株进行侵染,并以野生型烟草作为对照,分别在4d、7d和12d观察转基因烟草植株和对照植株上烟草花叶病的发病情况,并进行了分析；结果表明,插入CsRIPI基因的转基因烟草植株受到烟草花叶病毒侵染后,叶片病变程度减少,病斑体积减小,表明CsRIPI对烟草花叶病毒具有明显的抗性。最后,我们还构建了CsRIPIA基因的原核表达载体,将CsRIPIA基因的cDNA片段克隆到原核表达载体pCzn1中,使其与载体上的6X his标签进行融合,然后转化到Arctic ExpressTM原核宿主菌中,通过IPTG对重组蛋白进行了诱导表达,并对重组蛋白进行了纯化,为CsRIPIA蛋白抗体的制备以及该基因功能的进一步研究奠定了基础。