Survivin具有调控细胞有丝分裂和抑制细胞凋亡的功能，广泛表达于人的胚胎组织和多种人类常见肿瘤，在正常成人分化组织中并不表达。Survivin参与肿瘤的发生、发展，与肿瘤的预后不良、复发密切相关。了解survivin的表达调控可为肿瘤发生的分子机制提供基础，因此在本研究中我们克隆了不同长度的survivin基因启动子，分析转录因子Sp1、Sp3以及缺氧对survivin的表达调控机制。 一．人survivin基因启动子的克隆和活性研究 构建由987bp、596bp,269bp、158bp和60bp survivin基因近端启动子驱动的荧光素酶报告基因载体pLuc-surP1、pLuc-surP2、pLuc-surP3、pLuc-surP4和pLuc-surP5，经测序鉴定序列与文献报道一致。利用RT-PCR和Western blot方法检测HEK-293、A549、HeLa、HepG2和MDA-MB231细胞中survivin的表达，证实这些细胞株中均有不同程度的survivin表达。利用脂质体方法将不同长度survivin基因启动子驱动的报告基因载体瞬时转染这些细胞株，经荧光素酶活性检测，pLuc-surP1、pLuc-surP2、pLuc-surP3和pLue-surP4都表现出较高的活性，其中起始密码子ATG上游269bp的启动子活性最高，是survivin基因启动子的核心序列。而且，60bp的 survivin基因近端启动子的活性几乎丧失。 二．转录因子Sp1、sp3对survivin基因的表达调控 本实验选择269bp的survivin基因核心启动子，对潜在的Sp1位点突变构建荧光素酶报告基因载体，瞬时转染结果显示在HoLa和HEK-293，细胞中D(位于-148到-153)、E(位于-127到-140)位点突变后对survivin核心启动子的活性影响最大，下降大约50％。在HeLa和HEK-293细胞中，RT-PCR和Western blot结果证实mithramycin能够抑制细胞内源性的survivin表达，荧光素酶报告基因分析结果表明mithramycin抑制survivin核心启动子的活性。利用RNA干扰技术成功的抑制细胞内源性Sp1、Sp3的表达，共转实验结果显示干扰Sp1、Sp3能够抑制survivin核心启动子的活性，但是对内源性survivin的表达影响不大。过表达Spl、Sp3后不仅能诱导survivin核心启动子活性增高，而且能增强细胞内源性survivin的表达，提示Spl、Sp3反式激活survivin的表达。而且，实验结果提示Spl、Sp3的反式激活作用会发生叠加。EMSA实验表明在这些位点中A、E、G位点与转录因子Spl、Sp3的结合作用较强；D、F位点与转录因子Spl、Sp3有较弱的结合，B、C位点与转录因子Spl、Sp3之间无明显结合。 实验结果提示转录因子Spl、Sp3都能够反式激活survivin的表达，并且它们之间具有叠加效应。 三．缺氧对survivin基因的表达调控 本研究中RT-PCR和Western blot结果表明在HeLa细胞中缺氧能上调survivin的表达，在HepG2细胞中缺氧不能上调survivin的表达。进一步对survivin基因启动子驱动的报告基因载体进行瞬时转染分析，结果提示在HeLa细胞中具有缺氧诱导性；在HepG2细胞中无明显的缺氧诱导性。HeLa细胞中过表达低氧诱导因子-1α能诱导survivin核心启动子的活性，当我们将survivin核心启动子区潜在的缺氧反应元件突变后，该片段的缺氧诱导性仍然存在，并且仍然可以被HIF-1反式激活。 本部分的实验结果表明缺氧对survivin的表达调控依赖于细胞内环境，HIF-1参与HeLa细胞中缺氧诱导survivin表达的过程。