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本试验旨在研究猪源抗菌肽猪β-防御素-2(pBD2)作为抗生素替代品在体内抗菌消炎活性方面的临床应用效果。在试验室前期构建的工程菌株BL-p ET-pBD2的基础上,诱导并纯化出表达的目的蛋白pBD2,冻干保存并应用于动物感染试验。其结果如下:1.重组大肠杆菌菌株BL-p ET-pBD2的诱导与pBD2的纯化鉴定在实验室前期构建的工程菌株BL-p ET-pBD2的基础上,对其诱导表达,全蛋白的SDS-PAGE分析显示在低于14.3 KDa处有一条明显的目的蛋白特异性条带;经过亲和层析柱纯化、透析、浓缩得到的目的蛋白也在14.3 KDa的理论值处呈现出一条单一明显的蛋白条带,说明目的蛋白纯度与浓度都达到了试验要求。2.大肠杆菌ATCC25922感染剂量的确定本试验选取大肠杆菌ATCC25922作为感染菌株,无菌条件下将试验室保存的标准菌株E.coli ATCC 25922接种并复壮,然后将处于对数期的菌液倍比稀释,并取500μL分别注射到腹膜腔内,淘汰出现死亡的剂量和注射后无临床症状的剂量,选取注射后出现精神萎靡,饮食废绝,蜷缩呆立等临床症状和血常规检查后出现白细胞和中性粒细胞升高的剂量作为感染剂量。通过分析临床症状和血常规结果,试验的结果表明注射浓度为1.25×108CFU?m L-1(500μL)时作为感染剂量。3.小鼠的感染和pBD2对小鼠的抗感染效果试验为了探明pBD2对炎症小鼠的抗感染活性,选取临床上抗菌效果显著的抗生素环丙沙星作为阳性对照,并以只感染不治疗为感染对照,以不感染不治疗作为空白对照。分别于感染前和感染后颈部皮下注射与环丙沙星剂量相当的pBD2作为预防组和治疗组,并于实验结束时,记录体重及其脏器重量等。结果显示,各组小鼠体重无显著差异;空白对照组和阳性治疗组的脾脏平均重量显著的低于感染组,预防组和治疗组的脾脏平均重量虽然低于感染组,但差异不显著;治疗第三天时,阳性治疗组的WBC和Gran水平较感染组均降低且差异有统计学意义,治疗组的WBC和Gran水平较感染组均降低,其中只有WBC的数量有显著差异,预防组的WBC和Gran水平较感染组均无显著变化;阳性治疗组中,肺脏、肝脏、脾脏、肾脏均有轻微炎症表现。感染组中肺脏、肝脏、脾脏、肾脏均有明显的炎症特征。空白对照组正常。治疗组中,肺脏、脾脏、肾脏有轻微炎症。预防组中,肺脏、肝脏、脾脏、肾脏均有较明显的炎症反应。分析结果表明,pBD2对感染小鼠具有一定治疗作用但是预防作用不明显。。