【摘 要】
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神农香菊（Chrysanthemum indicum var.aromaticum）是一种珍稀的多年生草本植物,其在药用性和观赏性上具有很高的价值,因此在园林应用上具有广阔的发展前景。MYB转录因子家族庞大并且功能丰富,在众多生物学进程中都占据着重要作用。本研究在课题组前期成功克隆的神农香菊CiMYB61基因和已构建的CiMYB61过表达载体的基础上,为全面研究丰富神农香菊CiMYB61基因的功能
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神农香菊（Chrysanthemum indicum var.aromaticum）是一种珍稀的多年生草本植物,其在药用性和观赏性上具有很高的价值,因此在园林应用上具有广阔的发展前景。MYB转录因子家族庞大并且功能丰富,在众多生物学进程中都占据着重要作用。本研究在课题组前期成功克隆的神农香菊CiMYB61基因和已构建的CiMYB61过表达载体的基础上,为全面研究丰富神农香菊CiMYB61基因的功能,构建其RNAi载体,并对野菊（Chrysanthemum indicum）进行遗传转化,分别得到了过表达CiMYB61转基因野菊植株和抑制表达CiMYB61转基因野菊植株,并对CiMYB61转基因野菊叶片的表皮毛进行初步研究,主要研究结果如下:1.构建了神农香菊CiMYB61基因RNAi载体,从实验室前期获得的神农香菊CiMYB61基因ORF区序列中选取308bp作为RNAi干扰片段。将正义片段与反义片段分别连接到p HANNIBAL中间表达载体上的对应位置,中间加之PDK-intron间隔以起到沉默效果。将构建好的含发卡结构的CiMYB61（+）/p HANNIBAL/CiMYB61（-）插入植物表达载体p ART27中,自此成功构建了神农香菊CiMYB61基因的RNAi载体p RNAi-CiMYB61。再将成功构建的p RNAi-CiMYB61重组质粒利用电转化法成功导入到农杆菌感受态中,最终获得含p RNAi-CiMYB61重组质粒的农杆菌菌液。2.利用农杆菌介导法将PBI121-CiMYB61重组质粒转入野菊,经抗性筛选初步获得了过表达CiMYB61转基因阳性野菊植株,成功提取其叶片RNA后再反转录成c DNA,通过抗性植株的PCR鉴定以及qRT-PCR测定CiMYB61基因在抗性植株中的相对表达量的手段,证实成功获得2个过表达CiMYB61转基因阳性野菊株系。3.野菊RNAi遗传转化时叶盘筛选的Spec最适临界耐受浓度为10mg/L,生根筛选抗性苗的Spec最适临界耐受浓度为12mg/L,Cef的抑菌浓度为200mg/L。再利用农杆菌介导法将p RNAi-CiMYB61重组质粒转入野菊植株中,经抗性筛选初步获得了抑制表达CiMYB61转基因阳性野菊植株,成功提取其叶片RNA后再反转录成c DNA,通过抗性植株的PCR鉴定以及qRT-PCR测定CiMYB61基因在抗性植株中的相对表达量的方法,证实已成功获得1个抑制表达CiMYB61转基因阳性野菊植株。4.观测了野生型野菊（WT）、过表达CiMYB61转基因野菊、抑制表达CiMYB61转基因野菊叶片表皮毛的形态及密度。三者的T-形非腺毛形态皆存在差异;过表达CiMYB61转基因野菊株系的T-形非腺毛密度最大,其次为野生型植株,最后为抑制表达CiMYB61转基因野菊株系;过表达CiMYB61转基因野菊株系腺毛的长宽径皆显著大于其余两个株系;抑制表达CiMYB61转基因野菊的腺毛密度最为稀疏。
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