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研究背景:乳腺癌属于高度异质性的恶性肿瘤,存在很多不同的病理类型。不一样的病人的临床诊治具有较大的差异性,预后也表现出多种结果。三阴性乳腺癌的发生概率占所有乳腺癌患者的20%到25%之间,并且与预后不良具有直接关系。三阴性乳腺癌除化疗以外,予以其他现有手段治疗（如内分泌治疗或曲妥珠单抗靶向治疗）并没有较好的效果。对患者进行治疗后,三阴性乳腺癌患者会在较短的时间存在复发的状况,且其具有较高的淋巴结转移率,较强的侵袭性,很高的死亡率,会对妇女的生活质量以及生命安全造成严重影响。因此,研究三阴性乳腺癌的治疗手段已经成为医学研究者关注的重点。上皮-间质转化（EMT）是肿瘤发生发展的关键机制,参与恶性肿瘤的侵袭和转移的过程。而EMT相关分子在三阴性乳腺癌（TNBC）上的表达更高。上皮-间质转化与三阴性乳癌的预后密切相关,并且能够发现潜在的治疗靶点。恶性肿瘤能够通过蛋白水解降解ECM,而参与这些过程的一种蛋白水解系统是uPA系统,其由uPA,uPAR和uPA抑制剂1和2（PAI-1和PAI-2）组成。uPA是参与癌症侵袭和转移的细胞外基质降解蛋白酶,纤溶酶原激活剂抑制剂-1（PAI-1）最初被鉴定为血液来源的uPA内源性速效抑制剂。据报道,uPA,PAI-1和uPAR水平升高与三阴性乳腺癌患者预后不良有关。此外,uPA和PAI-1可能是腋窝淋巴结阴性患者的新预后标志物。迄今为止,越来越多的证据表明,uPA系统通过几种不同的机制促进肿瘤转移,而不仅仅是通过分解ECM[2]。乳腺肿瘤组织中uPA和PAI-1水平升高在统计学上是独立的,并且是患者预后不良的有效预测指标。除了预后之外,已有证据显示高水平的uPA和PAI-1能够预测早期乳腺癌患者的辅助化疗的益处。uPA/PAI-1作为淋巴结阴性乳腺癌预后生物标志物的独特临床效用已在两项独立研究中得到证实[3]。因此,uPA和PAI-1是目前可用于三阴性乳腺癌的最佳验证预后生物标志物。研究目的:本研究旨在通过刺激TNBC进行EMT,探究PAI-1分泌与TNBC细胞增殖、侵袭和转移的关系。并且建立异种移植小鼠模型和组织微阵列分析,观察PAI-1与体内异种移植肿瘤生长关系。探索PAI-1表达与TCGA数据库中TNBC患者的预后相关性,为临床治疗TNBC提供新的手段。研究方法:1.刺激TNBC细胞进行EMT,并使用TMT标记结合LC-MS/MS检测分泌蛋白质的表达谱,等方法,验证EMT可促进TNBC细胞分泌PAI-1。2.利用细胞计数、集落形成测定等实验方法探究分泌的PAI-1对于TNBC细胞株的影响。3.使用transwell、细胞划痕实验、免疫印迹、免疫荧光等实验方法探究分泌的PAI-1对于TNBC细胞迁移和侵袭的影响。4.建立PAI-1-/-小鼠模型,使用PBS、PAI-1或PAI-039皮下注射肿瘤周围,通过免疫组织化检测相关蛋白的表达,探究PAI-1对体内肿瘤生长的影响。5.利用165名TNBC患者的组织微阵列检测PAI-1、E-cadherin和N-cadherin的表达。分析了已发表的癌症基因组图谱（TCGA）乳腺肿瘤数据集,以全面了解乳腺癌中不同分子亚型的PAI-1基因表达。探索乳腺癌患者PAI-1基因表达的预后价值。结果:我们发现TNBC分泌的PAI-1可以促进细胞生长、迁移和侵袭,并且在EMT标记的TNBC细胞系和异种移植PAI-1-/-小鼠模型中发现相似的结果。通过研究165名TNBC患者的组织微阵列和已发表的乳腺癌数据库,我们发现乳腺癌组织中PAI-1表达显著高于正常邻近组织,并且与TNBC患者的预后相关。结论:本研究阐述了TNBC分泌的PAI-1可显著增加细胞增殖、迁移和侵袭,并在TNBC细胞系和异种移植PAI-1-/-小鼠模型中表达EMT标记物。PAI-1在TNBC细胞EMT过程中的重要作用,为临床TNBC患者开发PAI-1靶向疗法提供新的思路。