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背景与目的炎症性肠病(inflammatory bowel disease,IBD)发病率呈逐年上升的趋势,已成为全球的重要公共卫生问题。传统治疗药物如5-氨基水杨酸(5-ASA)和糖皮质激素有一定的疗效,但副作用较大。寻找和利用天然食物预防IBD具有重要意义。研究发现植物和真菌多糖对IBD有较好的防治效应。我们前期研究表明金针菇多糖(Flammulinavelutipes polysaccharide,FVP)能减轻葡聚糖硫酸钠盐(Dextran sulfate-sodium salt,DSS)诱导的大鼠IBD症状。本课题拟探讨FVP预防IBD的作用机制,进一步对组分进行纯化和结构鉴定,并对FVP纯多糖的功能进行初步研究。方法1.建立DSS诱导的大鼠IBD模型。48只雄性SD大鼠随机分为6组(n=8),即空白对照组、DSS造模组、FVP低、中和高剂量组、5-ASA组。对照组给予生理盐水灌胃14天,正常饮用水;模型组生理盐水灌胃14天,前6天正常饮用水,后8天DSS饮用水(4.5%);多糖组经口灌胃FVP(50、100、200mg/kg)14天,前6天正常饮用水,后8天DSS饮用水,第15天处死动物。2.效应评价:镜下观察病理标本炎症情况,测定结肠组织MPO。3.效应机制研究:(1)通过16SrRAN基因测序测定肠道菌群;(2)采用气相色谱测定肠道内短链脂肪酸的含量;(3)用RT-PCR和Werstern Blot方法检测结肠组织紧密连接蛋白Occludin、ZO和炎症信号分子TLR4、NF-κB的表达。4.FVP的纯化和结构鉴定:采用层析纯化对FVP进行提纯,后对纯多糖FVP1的分子量、单糖组成和糖苷键类型进行鉴定。5.FVP1活性研究:(1)通过对RAW264.7细胞分泌NO、TNF-α、IL-6和IL-12的影响;(2)对RAW264.7细胞线粒体呼吸功能的影响。结果1.造模组镜下可见上皮损伤严重,MPO活性显著高于对照组。FVP减轻了结肠病理损伤,显著降低了 MPO活性。2.造模组厚壁菌门同拟杆菌门的比值(F/B)下降,α多样性指数降低,病原菌如Helicobacteraceae丰度升高;有益菌如Lachnospiraceae和Lactobacillales的丰度降低。FVP上调了 F/B值和α多样性指数,降低了Helicobacteraceae 的丰度,升高了Lachnospiraceae和Lactobacillales的丰度。3.造模组乙酸、丙酸、丁酸的含量显著低于对照组,FVP提高了短链脂肪酸的含量,以中、高两个剂量组效果显著。4.造模组Occludin、ZO-1的表达显著低于对照组,TLR4和NF-κB的表达显著高于对照组;FVP对Occludin、ZO-1无明显影响,但是显著降低了TLR4和NF-κB的表达。5.FVP1的分子量为54.78kDa,由甘露糖(7.74%)、葡萄糖(70.41%)和半乳糖(16.38%)组成,糖苷键类型:(1→6)-β-D-半乳糖、α-D-葡萄糖、(1→3,6)-α-D-甘露糖。6.FVP1 促进了RAW264.7细胞分泌NO、TNF-α、IL-6和IL-12;提高了线粒体的最大耗氧量。结论FVP对DSS诱导的大鼠结肠炎有预防作用,能调节肠道菌群、增加短链脂肪酸的生成、抑制结肠粘膜炎症因子的表达。FVP1是一种新型多糖,它具有免疫调节活性,同时能改善线粒体呼吸功能。