高血压痰湿壅盛证microRNA基因谱表达及临床疗效观察

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目的:1.评价半夏白术天麻汤对高血压病痰湿壅盛证的临床疗效,为从方证对应角度研究高血压病痰湿壅盛证的病理机制和半夏白术天麻汤的作用靶点研究提供临床依据;2.通过microRNA基因芯片技术探究高血压痰湿壅盛证患者与正常对照组之间血浆microRNA的表达差异,筛选差异表达的microRNA,并对其进行靶基因预测及生物信息学分析,为半夏白术天麻汤治疗高血压痰湿壅盛证的干预研究提供潜在靶点。
  方法:(一)临床观察:收集64例临床高血压痰湿壅盛证患者,将其随机分为治疗组与对照组,每组32例,治疗方案为对照组西医常规治疗,治疗组在西药常规治疗上给予中药半夏白术天麻汤加减。从普通血压、动态血压、血脂水平及中医症候疗效积分方面观察半夏白术天麻汤对高血压患者的影响。(二)实验研究:纳入山东省中医院心病四科门诊及病房12例高血压痰湿壅盛证志愿者的血浆及12例健康志愿者的血浆,将获取的血浆样本送于上海中科普瑞基因科技有限公司,采用Agilent Human miRNA高通量基因芯片进行microRNA检测,筛选差异microRNA,进行靶基因预测,对差异表达microRNA进行功能富集分析,并运用qRT-PCR方法验证高通量芯片测序的microRNA,探索microRNA表达差异及意义,总结高血压痰湿壅盛证microRNA基因表达特点。
  结果:(一)临床观察:(1)疾病疗效总有效率:治疗组为83.87%,对照组为62.06%,治疗组疗效优于对照组(P<0.05)。(2)治疗后诊室血压比较,两组血压水平均有效降低,治疗组优于对照组(P<0.05)。(3)治疗后24h动态血压比较,两组24h动态血压各个指标较治疗前均降低,差异具统计学意义(P<0.05);组间比较,两组在24h平均收缩压、24h平均舒张压、日间平均收缩压、夜间平均收缩压降低方面有差异(P<0.05),治疗组疗效优于对照组;在日间平均舒张压、夜间平均舒张压方面的差异无统计学意义(P>0.05)。(4)血脂水平方面,治疗后治疗组总胆固醇、低密度脂蛋白较前降低,差异具统计学意义(P<0.05),对照组无明显变化(P>0.05);组间比较,两组在总胆固醇、低密度脂蛋白降低方面有差异(P<0.05),治疗组优于对照组。(5)中医症候积分比较,治疗组中医证候积分改善优于对照组(P<0.05)。(6)单项中医症候积分比较,治疗后,治疗组对所有各单项症状均有改善作用(P<0.05);对照组对眩晕、头胀头痛、头重、胸脘痞闷、恶心呕吐痰涎有改善作用(P<0.05);而对困倦、纳呆、失眠、心悸等方面无改善作用(P>0.05)。两组比较,结果提示治疗组在改善中医症状上优于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。(二)实验研究:(1)高血压痰湿壅盛证患者与健康对照组共筛选出10个差异表达的microRNA,包括3个上调的microRNA(hsa-miR-16-5p、hsa-miR-197-5p、hsa-miR-642a-3p)和7个下调的microRNA(hsa-miR-1296-3p、hsa-miR-3613-3p、hsa-miR-4324、hsa-miR-4485-3p、hsa-miR-6090、hsa-miR-6741-3p、hsa-miR-7975)。(2)对差异表达的microRNA的靶基因进行功能分析,GO分析显示靶基因多富集于血管内皮功能、体细胞发生中的轴延伸、动脉内皮分化(生物学过程)、CRD介导的mRNA稳定复合物、蛋白磷酸酶1型复合物、RISC复合体(细胞组分)及connexin连接蛋白结合、丝氨酸/苏氨酸磷酸酶抑制、I-SMAD结合(分子功能),KEGG分析显示靶基因富集于Wnt信号通路、Hippo信号通路、Foxo信号通路。
  结论:半夏白术天麻汤治疗高血压痰湿壅盛证具有一定的临床疗效,效果优于西药治疗组,可有效降低血压、总胆固醇、低密度脂蛋白水平,改善临床症状。与健康人相比,高血压痰湿壅盛证患者的血浆microRNA表达谱出现显著变化,hsa-miR-16-5p、hsa-miR-4324可能作为高血压痰湿壅盛证发病的潜在标志物,生物学信息分析表明差异表达的microRNA与高血压病、代谢性疾病和肿瘤的发生具有相关性,涉及的发病机制可能与Wnt信号通路、Hippo信号通路、Foxo信号通路有关。
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