番茄TFT1和TFT10基因的表达分析及超表达载体构建

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14-3-3蛋白是一种广泛存在于真核生物中的小分子调节蛋白,能够与多种靶蛋白相互作用来调节靶蛋白活性,进而调控细胞的多种生理过程。番茄中共有12个14-3-3基因:TFT1-TFT12。其他作物中研究显示14-3-3蛋白可以与蔗糖代谢关键酶SPS互作并下调其活性。为了探究TFT1和TFT1O对番茄蔗糖代谢的影响,本研究分析了TFT1和TFT10在栽培型番茄Micro-Tom (Solanum lycopersicum)和野生型番茄克梅留斯基(Solanum chmielewskii)中的表达模式,并构建了植物超表达载体、建立了野生型番茄的再生体系。主要结果如下:1、Q-PCR表达分析显示TFT1和TFT1O基因在栽培型番茄和野生型番茄的果实中均有表达,但表达模式差异较大:TFT1的表达量在番茄果实发育的中后期较高,且蔗糖积累型番茄克梅留斯基中的表达量增加比己糖积累型番茄Micro-Tom中的表达量明显的多;TFT10的表达量,在己糖积累型番茄Micro-Tom果实发育过程中逐渐升高;而在蔗糖积累型番茄克梅留斯基果实发育的整个过程中水平较低,且变化不大。这暗示TFT1和TFT10可能参与了番茄蔗糖代谢的调控,影响番茄果实的发育过程。2、建立了野生番茄克梅留斯基的再生体系。以野生型番茄克梅留斯基的子叶和下胚轴为外植体,以MS为基本培养基,添加不同激素组合,筛选出诱导野生型番茄克梅留斯基愈伤组织产生和分化的最佳培养基,建立起番茄克梅留斯基的再生体系。实验结果表明:子叶更适合作为野生型番茄克梅留斯基的外植体;野生型番茄克梅留斯基子叶愈伤组织的最佳诱导培养基为MS+0.5mg/L IAA+2.0mg/L6-BA,诱导率为100%,野生型番茄克梅留斯基下胚轴愈伤组织的最佳诱导培养基为MS+0.2mg/L IAA+2.0mg/L6-BA,诱导率为98%;最佳生根培养基为MS+1.Omg/L IAA,生根率达100%。为野生型番茄克梅留斯基遗传转化体系的建立奠定基础。3、构建了番茄TFT1和TFT1O基因的植物超表达载体pCAMBIA1304-TFT1和pCAMBIA1304-TFT10,并成功导入农杆菌EHA105。为进一步转化番茄植株,深入研究TFT1和TFT1O的功能奠定基础。
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