【摘 要】
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1.目的:牛支原体（Mycoplasma bovis,M.bovis）是危害养牛业的重要致病性支原体。近年来,新疆石河子垦区奶牛业发展迅速,同时也在很多牛场发现了由M.bovis引起的疾病,目前尚无较为详细的奶牛M.bovis病流行病学资料。2020-2021年,在石河子垦区选取5个规模化奶牛场,在4个不同季节（秋季2020年10月、冬季2021年1月、春季4月、夏季7月）分别采集奶牛的血样、乳样
【基金项目】
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2016年国家重点研发计划（2016YFD0500907）； 兰州兽医研究所“元亨人才”计划（农科兽医2020-119）；
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1.目的:牛支原体（Mycoplasma bovis,M.bovis）是危害养牛业的重要致病性支原体。近年来,新疆石河子垦区奶牛业发展迅速,同时也在很多牛场发现了由M.bovis引起的疾病,目前尚无较为详细的奶牛M.bovis病流行病学资料。2020-2021年,在石河子垦区选取5个规模化奶牛场,在4个不同季节（秋季2020年10月、冬季2021年1月、春季4月、夏季7月）分别采集奶牛的血样、乳样、鼻拭子,采用ELISA方法和荧光定量PCR方法检测奶牛M.bovis感染情况,此外,采用PCR方法针对M.bovis阳性样本检测其毒力基因携带情况,为防控M.bovis病提供参考资料。2.试验方法:（1）规模化奶牛场M.bovis感染的血清流行病学调查:成年奶牛选取尾静脉采血、犊牛选取颈静脉采血,静置法或离心法分离血清。采用牛支原体ELISA抗体检测试剂盒检测牛支原体血清抗体。（2）规模化奶牛场M.bovis感染的荧光定量PCR检测:成年奶牛采四个乳区的混合乳样;每个季节采样时,对每个牛场大罐奶中的乳样连续采集7天;用鼻拭子采集犊牛鼻腔粘液;提取乳样和鼻拭子的DNA,采用牛支原体p80基因为靶基因的荧光定量PCR方法检测牛支原体病原。（3）规模化奶牛场M.bovis毒力基因检测:选取M.bovis阳性奶牛的乳样DNA与鼻拭子样DNA,采用PCR方法检测M.bovis Vsp Y2、Vsp X、Vsp HB0801-1、Vpma、p48、p81毒力基因,并进一步通过构建进化树分析毒力基因的同源性。3.试验结果:（1）规模化奶牛场M.bovis感染的血清流行病学调查结果:总共采集到奶牛血清2116份,其中包含犊牛血清600份;泌乳奶牛血清902份;隐性乳房炎奶牛血清376份;临床乳房炎奶牛血清238份。结果显示,5个规模化奶牛场奶牛总的血清抗体阳性率为31.99%,其中犊牛阳性率为27.17%,泌乳奶牛阳性率为34.59%,隐性乳房炎奶牛阳性率为29.26%,临床乳房炎奶牛阳性率为38.66%,其中临床乳房炎奶牛阳性率极显著高于隐性乳房炎奶牛和犊牛阳性率（P＜0.01,P＜0.01）。一年中,不同季节的M.bovis血清阳性率分别为夏季37.03%、冬季36.41%、秋季30.36%、春季24.52%,其中,春季M.bovis血清阳性率显著、极显著地低于秋季、冬季、夏季M.bovis血清学阳性率（P＜0.05,P＜0.01,P＜0.01）。（2）规模化奶牛场M.bovis感染的荧光定量PCR检测结果:共采集乳样和鼻拭子总共2116份,其中包括犊牛鼻拭子600份;泌乳奶牛乳样902份;隐性乳房炎奶牛乳样376份;临床乳房炎奶牛乳样238份;此外,对5个规模化奶牛场的大罐乳样连续采集7天的乳样,采集4次,共采集140份大罐乳样。检测结果表明,所有奶罐乳样的M.bovis荧光定量PCR阳性率为100%;5个规模化奶牛场的M.bovis荧光定量PCR阳性率为27.65%,其中犊牛为21.50%,泌乳奶牛为32.93%,隐性乳房炎奶牛为24.73%,临床乳房炎奶牛为27.73%。其中泌乳奶牛的M.bovis荧光定量PCR阳性率极显著地高于犊牛和隐性乳房炎奶牛（P＜0.01,P＜0.01）。一年中,不同季节M.bovis荧光定量PCR阳性率分别为秋季34.82%、冬季32.61%、夏季26.15%、春季15.31%,其中春季奶牛M.bovis荧光定量PCR阳性率极显著低于秋季、冬季、夏季（P＜0.01,P＜0.01,P＜0.01）。（3）规模化奶牛场M.bovis毒力基因检测结果:共选取M.bovis阳性奶牛的乳样和鼻拭子共200份,其中乳样162份、鼻拭子38份。检测结果表明,毒力基因Vsp X携带率为22.5%;毒力基因Vsp HB0801-1携带率为20.50%,毒力基因p48、Vpma的携带率均为18.00%;未检测到毒力基因VspY2、p81。进化树分析表明,VspX、Vpma、VspHB0801-1和p48基因与其他分离株的同源性较高。4.结论:（1）石河子垦区规模化奶牛场普遍存在M.bovis感染。（2）临床乳房炎牛和泌乳牛的感染率较高,犊牛的M.bovis感染率最低,其次为隐性乳房炎牛。（3）在一年中,春季的M.bovis感染率最低,其他季节感染率较高。（4）VspHB0801-1是石河子垦区奶牛场M.bovis携带率最高的毒力基因,不同规模化奶牛场的M.bovis病原携带的毒力基因的分布存在差异性。
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