【摘 要】
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目的:结直肠癌是常见的恶性肿瘤,在15～20%的结直肠癌中发现E3泛素连接酶FBXW7的突变。据报道FBXW7α可降解热休克转录因子1,FBXW7α缺陷的黑色素瘤细胞在外源性应激后的恢复阶段胞核HSF1水平恢复异常,而细胞质HSF1蛋白水平无显著差异。激活的HSF1在细胞核中的异常水平与多种恶性肿瘤的发生和转移有关。但是,关于下调FBXW7导致激活的HSF1在细胞核大量累积的原因还尚未阐明。我们主
【基金项目】
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项目名称:SCF泛素连接酶调控CCL2-CCR2轴在肺癌侵袭转移中的作用及机制研究,项目合同编号:2018GXNSFAA281177,项目来源:广西自然科学基金,项目起止时间:2019-2021年； 项目名称:Cullin-RINGE3泛素连接酶在非小细胞肺癌多西他赛耐药中的作用及分子机制,项目合同编号:81560483,项目来源:国家自然科学基金,项目起止时间:
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目的:结直肠癌是常见的恶性肿瘤,在15～20%的结直肠癌中发现E3泛素连接酶FBXW7的突变。据报道FBXW7α可降解热休克转录因子1,FBXW7α缺陷的黑色素瘤细胞在外源性应激后的恢复阶段胞核HSF1水平恢复异常,而细胞质HSF1蛋白水平无显著差异。激活的HSF1在细胞核中的异常水平与多种恶性肿瘤的发生和转移有关。但是,关于下调FBXW7导致激活的HSF1在细胞核大量累积的原因还尚未阐明。我们主要研究FBXW7对结直肠癌细胞激活的HSF1蛋白在胞浆和胞核中蛋白稳定性和定位的影响,观察磷酸化HSF1在癌细胞中的异常蛋白水平和荧光定位情况。探索FBXW7是否降解激活及衰减期间的HSF1,为FBXW7成为结直肠癌潜在分子靶标的治疗策略提供了理论依据。方法:1.采用瞬时转染法使PcDNA3-HA-FBXW7α在结直肠癌细胞中过表达,利用蛋白免疫印迹的方法验证过表达PcDNA3-HA-FBXW7α对HSF1蛋白和pHSF1Ser326蛋白水平的影响。2.利用蛋白免疫印迹法和细胞免疫荧光实验检测在结直肠癌细胞中缺失FBXW7后对HSF1和pHSF1Ser326蛋白水平和定位的影响。3.对结直肠癌细胞进行水浴温热刺激,并在37℃中恢复培养指定时间。利用蛋白免疫印迹的方法和细胞免疫荧光实验检测HSF1在缺失FBXW7的结直肠癌细胞中蛋白水平和定位情况。4.对结直肠癌细胞进行水浴温热刺激,并在37℃中恢复培养指定时间。利用蛋白免疫印迹的方法检测HSF1和pHSF1Ser326的胞浆蛋白和胞核蛋白的水平。利用细胞免疫荧光实验观察pHSF1Ser326在缺失FBXW7的结直肠癌细胞中的蛋白水平和定位情况。结果:1.蛋白免疫印迹结果表明过表达FBXW7α的结直肠癌细胞中,HSF1蛋白和pHSF1Ser326蛋白水平呈减少趋势。2.蛋白免疫印迹结果显示缺失FBXW7的结直肠癌细胞中,HSF1蛋白和pHSF1Ser326蛋白水平呈升高的趋势。细胞免疫荧光实验结果显示缺失FBXW7的结直肠癌细胞中,HSF1和pHSF1Ser326主要在细胞核中表达,而在细胞质中仅有少量表达。3.利用细胞免疫荧光法观察温热刺激细胞后,HSF1在细胞核中的荧光表达水平显著上升。在37℃恢复培养30分钟后,WT的HCT116细胞和DLD1细胞中的HSF1在细胞核的荧光强度恢复至刺激之前的水平,但敲除FBXW7的结直肠癌细胞中HSF1在细胞核的荧光强度仍然很强。4.通过细胞核质蛋白分离实验发现温热刺激细胞后在37℃恢复培养60分钟,WT的HCT116细胞和DLD1细胞中的pHSF1Ser326的核蛋白恢复至未刺激水平,而缺失FBXW7的结直肠癌细胞的pHSF1Ser326的核蛋白水平相比较未刺激时的蛋白水平显著上调。5.利用细胞免疫荧光发现温热处理的pHSF1Ser326在细胞核的荧光表达水平显著升高,恢复培养60分钟后,pHSF1Ser326在缺失FBXW7的细胞的胞核中荧光表达水平很高,但在细胞质中水平较低。结论:缺失FBXW7的结直肠癌细胞温热刺激后,激活HSF1在细胞核中蛋白水平迅速升高,热激后细胞核HSF1水平恢复受阻,而细胞质中HSF1水平无显著差异。这可能与缺失FBXW7不能降解激活及转入胞核的HSF1有关。
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＜正＞【教学内容】人教版小学数学教材五年级下册第104～105页。【教学目标】1.认识折线统计图，掌握绘制折线统计图的方法。了解折线统计图的特点，能对统计的数据进行合理解释，并能根据数据信息做出简单的判断和预测。2.经历探究折线统计图的过程，感受从具体到一般的数学思想方法。3.感受折线统计图在生活中的应用和价值，发展数据分析观念。【教学重点】认识折线统计图，了解折线统计图的特点。
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