论文部分内容阅读
目的：探讨亚低温对D-GalN/LPS诱导急性肝衰竭大鼠的保护作用，研究亚低温对急性肝衰竭大鼠血清ALT、AST、TNF-α、IL-10以及肝脏细胞色素C、caspase3蛋白表达的影响。方法：1、SD大鼠72只随机分为对照组（24只）、模型组（24只）、亚低温组（24只）。采用腹腔内注射D-GalN（400mg/kg）联合LPS（100μg/kg）制备急性肝衰竭模型。模型组和亚低温组以D-GalN/LPS腹腔注射造模，对照组给予等量生理盐水腹腔注射，亚低温组在造模后立即进行亚低温处理。各个组按造模后4h、8h和12h处死，取标本。2、参考Kim的方法，采用向大鼠全身喷洒酒精加吹风来进行降温，确保大鼠肛温在规定的时间(15-20min)内降至预定温度(32～35℃)，前1小时每15min检测肛温，后每30分钟检测一次，确保肛温在32～35℃之间并维持到实验结束。3、检测各组大鼠血清ALT、AST，HE染色观察肝脏组织病理变化，ELISA法检测血清TNF-α、IL-10，Western blot法检测肝细胞浆细胞色素C蛋白和肝细胞caspase3蛋白的表达水平。结果：1、亚低温组血清ALT、AST水平在8h和12h时明显低于同时间点模型组（ALT8h P=0.049，12h P=0.039；AST8h P=0.014，12h P=0.024），4h时与模型组相比无明显差异（ALT P=0.43，AST P=0.19）。2、对肝组织切片HE染色可以发现，对照组各时间点大鼠肝组织形态正常，模型组和亚低温组大鼠肝组织病理改变随着时间的延长逐渐加重。实施亚低温后4h和8h对肝组织无明显改善。12h时亚低温组肝细胞坏死范围较模型组减少，炎性细胞浸润减少，残留肝细胞较模型组多。3、亚低温组血清TNF-α水平在4h时与模型组比较明显降低（P=0.021），8h和12h时与模型组同时间点相比无明显差异（8h P=0.209；12h P=0.093）。亚低温组3个时间点血清IL-10水平与模型组比较差异均无统计学意义（4hP=0.545，8h P=0.389；12h P=0.169）。4、亚低温组肝细胞胞浆Cyt C蛋白的表达在8h时与模型组相比显著降低，差异有统计学意义（P=0.001），4h和12h与模型组同时间点相比无明显差异（4hP=0.829，12h P=0.061）。5、亚低温组肝细胞活化的caspase3(cleaved-caspase3)蛋白表达量在8h时与模型组相比显著降低，差异有统计学意义（P=0.016），4h和12h与模型组同时间点相比无明显差异（4h P=0.790，12h P=0.619）。结论：通过本研究可以发现，亚低温降低急性肝衰竭大鼠血清ALT、AST，改善肝脏的病理表现，降低血清TNF-α水平，减少肝脏细胞线粒体细胞色素C的释放和胞内caspase3的裂解；同时也发现亚低温治疗对血清IL-10无明显影响。本研究表明亚低温对急性肝衰竭的肝细胞有保护作用。