【摘 要】
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为了抑制c-sis/PDGFB原癌基因的异常表达以期达到抗肿瘤的功效,该组采用新兴的"抗基因"技术,即利用TFO(triplex-formingoligonucleotide,三链形成寡核苷酸)与靶双链DNA分子之
【出 处】
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中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所 中国科学院上海生命科学研究院
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为了抑制c-sis/PDGFB原癌基因的异常表达以期达到抗肿瘤的功效,该组采用新兴的"抗基因"技术,即利用TFO(triplex-formingoligonucleotide,三链形成寡核苷酸)与靶双链DNA分子之间形成三链的原理.针对c-sis/PDGFB原癌基因5上游启动子核心区设计TFO.为在细胞内持续高效表达三链形成RNA,该组克隆人核心小分子RNAU6基因,并在此基础上构建了一种依赖于聚酶Ⅲ的体内高效表达反义RNA、三链形成RNA及Ribozyme的新开体pBSKneoU6.Hela细胞核心抽提物体外转录实验证明该载体能有效表达U6变体RNA分子,携带人caspase-3核酶基因的U6嵌合型载体pU6RZ107在细胞内能有效地表达核酶及下调靶mRNA水平.为了进一步研究PDGF-BB蛋白与肿瘤的相关性,该组克隆了c-sis/PDGFB基因,并在大肠杆菌中得到与GST(glutathioneS-transferase,谷胱甘肽转移酶)融合高表达的单链PDGF-B蛋白.同时向人乳腺癌MCF-7细胞系转染携带c-sis/PDGFB基因的真核表达质粒,竞争RT-PCR、Northern和Western结果证明该基因在MCF-7中得到高达.进一步的动物水平实验证明PDGF-BB蛋白可刺激乳腺中纤维骨架的形成,为肿瘤细胞的快速增殖血管依附提供支架.
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