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目的：提取纯化结核分枝杆菌（MTB）特异性抗原，建立规范的MTB特异性抗体酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA)及斑点免疫渗滤试验(dot immunofiltration assay, DIGFA)检测系统。用建立的检测系统检测血清中的抗结核抗体，评价其在结核病（TB）血清学检测中的应用价值。方法：以实验室现有的重组MTB蛋白库为基础，表达纯化11种具用应用前景的MTB重组蛋白并提纯1种天然MTB脂多糖抗原（MTB-LPS）；分别确定各抗原最佳包被浓度和最佳第二抗体稀释度，建立规范的ELISA检测系统，用建立的ELISA检测系统检测192例结核血清，68例非TB患者血清，210例健康人血清共470份血清标本中的抗结核抗体水平，并比较在不同的阳性界值下各种抗原对TB检测的灵敏度及特异度的差别，以此筛选出敏感性好、特异度高、互补性强的抗原进行组合，并评价该组合在TB血清学诊断中的价值。以该抗原组合为基础建立胶体金免疫渗滤检测系统并对检测120例结核血清，60例非TB患者血清，60例健康人血清共240例血清标本进行检测，同时以目前已获得临床批文、国内应用广泛的MTB抗体胶体金法诊断试剂盒（上海奥普生物医药有限公司生产）作为参比试剂进行对比试验，评价该免疫胶体金渗滤试剂盒在TB诊断中的应用价值。结果：1、经亲和层析后得到了11种纯度较高的MTB重组蛋白，提纯的MTB脂多糖抗原未见核酸及蛋白残留。2、获得优化的ELISA检测条件：辣根过氧化物酶（HRP）标记的羊抗人IgG最佳稀释度为1:10000，重组蛋白最佳包被浓度在1.6-6.3ug/ml之间，脂多糖抗原最佳包被浓度为0.16ug/ml。并应用ELSA检测系统检测了470例血清标本中抗结核抗体水平，以ROC曲线计算出最佳临界点作为界值，12种抗原的灵敏度分别为60.5%至82.9%，特异度分别为64.1%至92.7%；以x±3SD作为界值，12种抗原的灵敏度分别为13.3%至40.5%，特异度分别为96.4%至99.5%。3、各抗原之间存在一定的相关性和互补性，不能互相替代；将具有较强互补作用的r38kD、MTB-LPS、r16kD、rMPT63四种抗原进行组合过程中，随着组合抗原数的增多，检测灵敏度由29.0%提高至65.2%，特异度仅由96.9%降至90.0%。4、制备了以r38kD、MTB-LPS、r16kD、rMPT63四种抗原为基础的免疫胶体金渗滤试剂盒。240例血清标本的检测结果显示，本文制备的免疫胶体金渗滤试剂盒与MTB抗体胶体金法诊断试剂盒（上海奥普生物医药有限公司）相比，二者在肺结核组及健康对照组两个组别中的检测结果无显著性差别，但在非结核疾病组的检测中，本文的胶体金渗滤检测试剂盒要优于对照试剂盒。结论：1、成功地制备了12种用于TB血清学检测的抗原，并在此基础上成功地建立了ELISA和DIGFA检测系统。ROC曲线计算出最佳临界点作为界值各抗原的灵敏度较以x±3SD作为界值的灵敏度高，但特异性略低；由于各抗原在灵敏度及特异度上都存在着互补性，随着组合抗原的增加，检测灵敏度提高的同时，特异性会显著降低。因此，在组合抗原检测过程中，选择x±3SD作为界值更为适合。2、本文制备的胶体金检测试剂盒与传统的抗酸杆菌染色法(痰涂片法)相比，在灵敏度方面有明显的优势；与目前已获得临床批文、在国内广泛应用的MTB抗体胶体金法诊断试剂盒相比，在特异度方面明显优于对照试剂盒，灵敏度与对照试剂盒比较无显著性差别。