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目的:探讨苦豆子总碱(TAsA)治疗大鼠溃疡性结肠炎的作用机制。
方法:1.观察TASA对溃疡性结肠炎(UC)大鼠模型病理改变的影响,大鼠UC模型由三硝基苯磺酸(TNBS)/乙醇灌肠制成,评价UC大鼠在急慢性期(第7、21天)的症状和观察结肠组织学变化;2.通过流式细胞术观察TASA对UC大鼠外周血(PB)和结肠组织(COLON)中调节性T细胞(regulatory T cells,Tr)CD4<+>CD25<+>,CD8<+>CD28<->分别在急慢性期中表达的影响;3.通过酶联免疫吸附法(ELISA)和逆转录酶PCR(RT-PCR)观察TASA对UC大鼠细胞因子IL-10表达的影响;4.探讨COLON炎症慢性期的疾病活动指数评分(DAI)与CD8<+>CD28<->Tr之间的相关性,COLON炎症慢性期的组织学损伤与CD8<+>CD28Tr之间的相关性;PB CD4<+>CD25<+>Tr和细胞因子IL-10表达的相关性;COLON CD4<+>CD25<+>Tr和细胞因子IL-10表达的相关性。
结果:1.在急慢性期中,模型组大鼠DAI和组织学损伤评分显著高于正常组(P<0.05),TASA三个剂量组(60、30、15mg/kg)在慢性期中均低于模型组(P<0.05)。2.①建模后第7天:与正常对照组相比,模型组COLON内T细胞亚群CD4<+>CD25<+>,cD4<+>cD25<+>/CD25<->显著降低,CD8<+>CD28<->及CD8<+>CD28<->/CD28<+>显著升高(P<0.05),TASA三个剂量组虽有调节作用,但统计学差异不显著(P>0.05)。②建模后第21天:与正常对照组相比,模型组COLON中的CD4<+>CD25<+>、CD4<+>CD25<+>/CD25<->表达显著降低,CD8<+>CD28<->、CD8<+>CD28<->/CD28<+>的表达显著升高(P<0.01),TASA三个剂量组能有效的调节其表达(P<0.05);模型组大鼠PB中的CD8<+>CD28<->和CD8<+>CD28<->/CD28<+>的表达高于正常对照组,TASA三个剂量组能有效的下调其高表达(P<0.05)。③除正常组外,模型组、5-ASA组、苦豆子三个剂量组的COLONCD8<+>CD28<->表达的增长幅度与PB的相比,分别在第7天和第21天中都有显著性意义(P<0.05)。3.在ELISA检测中,模型组COLON和PB中IL-10的表达较对照组均显著降低(P<0.01),其中以COLON中的IL-10降低的更加明显(P<0.01);且TASA高、中、低三个剂量组都能显著性上调COLON和PB中的IL-10的表达(P<0.05),但COLON的治疗变化与PB的相比差异不明显。4.COLON炎症慢性期的DAI与CD8<+>CD28<->Tr之间存在的正相关性(Pearson r=0.828,p<0.01),COLON炎症慢性期的组织学损伤与CD8<+>CD28<->Tr之间存在正相关性(Pearson r=0.819,P<0.01);COLON炎症慢性期的CD4<+>CD25<+>Tr与细胞因子IL-10表达成正相关(Pearson r=0.789,P<0.01);PB炎症慢性期的CD4<+>CD25<+>Tr与细胞因子IL-10表达无相关性(Pearson r=-0.191,P>0.05),每组检测都为双侧,样本容量N=42。
结论:1.苦豆子总碱能改善UC大鼠结肠的一般病理变化:各给药组可见黏膜脱落或坏死减轻,黏膜及黏膜下层炎细胞(淋巴细胞,中性粒细胞,嗜酸性粒细胞)浸润减少,纤维组织只有少量增生,偶见小溃疡,症状改善明显;2.TASA通过有效的调节CD4<+>CD25<+>Tr、CD8<+>CD28<->Tr,缓解炎症反应;3.TASA能升高UC大鼠血清细胞因子IL-10的表达,改善炎症状态;4.COLON炎症慢性期的DAI与CD8<+>CD28<->Tr之间存在的正相关性,COLON炎症慢性期的组织学损伤与CD8<+>CD28<->Tr之间存在正相关性;COLON炎症慢性期的CD4<+>CD25<+>Tr与细胞因子IL-10表达成正相关;PB炎症慢性期的CD4<+>CD25<+>Tr与细胞因子IL-10表达无相关性。