转基因技术在顶复器门原虫的研究中得到了日渐广泛的应用，成为揭示此类原生动物生物学特征的重要工具。与刚地弓形虫、疟原虫相比，艾美耳球虫由于自身特点的制约，其转基因研究相对比较落后。探索构建含有报告基因的穿梭载体，通过转染在球虫中实现报告基因的瞬时高效表达，并进一步建成稳定转染系统，意义深远。这类基因操作一旦成功，将揭示球虫生物学中不为人知的一面，预示着一种新型的外源蛋白表达系统的产生，有助于完善球虫病及其它相关疾病的防治措施。 本试验的目的是构建用于柔嫩艾美耳球虫瞬时转染的穿梭载体。以真核表达载体pd2EYFP-N1为原始载体，用PCR法扩增并克隆了柔嫩艾美耳球虫组蛋白4、热激蛋白70基因的5UTR和肌动蛋白基因的3UTR，将其分别作为黄色荧光蛋白报告基因的上下游调控序列，构建了瞬时转染用的重组穿梭载体，即以单个黄色荧光蛋白编码区或两个串联的黄色荧光蛋白编码区作为报告基因，并通过电转染分别转染了Vero细胞和柔嫩艾美耳球虫孢子囊。转染结果显示，两个串联起来的黄色荧光蛋白可以在真核细胞中实现正常表达；后续DNA测序显示载体构建正确，可用于下一步的转基因研究。