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[目的]通过提取培养心肌细胞及建立损伤心肌细胞模型,研究Wnt/ β-catenin信号通路是否参与心肌细胞凋亡,并将骨髓间充质干细胞与损伤心肌细胞共培养,进一步探讨Wnt/β-catenin信号通路及心肌细胞凋亡的变化,为损伤心肌细胞的骨髓间充质干细胞移植治疗提供-定的实验结果。[方法]应用酶消化法及差速贴壁法获得乳鼠原代心肌细胞,用免疫组化法检测所获得细胞中有无α-横纹肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin, α-SMA)以鉴定心肌细胞。用1mg/L阿霉素(Adriamycin,ADR)建立损伤心肌细胞模型[1],据不同的损伤时间将心肌细胞分为A、B、C、D四组,A:ADR损伤心肌细胞12h, B:ADR损伤心肌细胞24h,C:ADR损伤心肌细胞48h,D：正常心肌细胞组,应用Western blot法检测各组的Wnt2、β-catenin及p53蛋白的表达差异。进一步分离、鉴定并培养骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells, BMSCs),将心肌细胞分为三组：E：正常心肌细胞组,F：损伤心肌细胞组,G:BMSCs与损伤心肌细胞共培养组。应用流式细胞仪检测各组心肌细胞凋亡率,应用Western blot法检测β-catenin、c-myc、p53蛋白的表达。[结果]1.对获得的乳鼠原代心肌细胞培养后进行α-横纹肌肌动蛋白检测,染色呈阳性,提示体外培养的细胞为心肌细胞。2.对A、B、C、D四组进行wnt2、β-catenin及p53蛋白检测,结果显示,wnt2蛋白在A、B、C组的表达量分别为0.24+0.04、1.15+0.05,0.35+0.05, β-catenin蛋白在A、B、C组的表达量分别为0.21+0.04、0.34+0.04、0.71+0.04,p53蛋白在A、B、C组的表达量分别为0.17+0.03、0.61+0.40、0.83+0.04, wnt2、β-catenin及p53蛋白在A、B、C组的表达量逐渐增加,差异均有统计学意义(P<0.01)。Wnt-2、β-catenin和p53在D组中无表达,Wnt-2和β-catenin相关系数为0.314、wnt2和p53相关系数为0.584,其中p53与β-catenin的表达呈显著正相关(r=0.940),差异均有统计学意义(P<0.01)。推测Wnt/β-catenin信号通路参与心肌细胞的损伤过程。3.E组心肌细胞凋亡率为(0.74±0.65)%,F组为(26.58±3.89)%,G组为(7.72±0.90)%,经两两比较发现,F组的凋亡率高于E、G组,差异均有统计学意义(P<0.01)。4.E组β-catenin、c-myc及p53三种蛋白表达不能测出,F组的β-catenin, c-myc, p53蛋白表达水平均高于G组,两组间差异有统计学意义(P<0.01)。β-catenin与c-myc的相关系数为0.942、β-catenin和p53的相关系数为0.852,c-myc与p53相关系数为0.927,三者之间呈显著正相关关系,差异均有统计学意义(P<0.01)。推测BMSCs可抑制损伤心肌细胞的凋亡蛋白p53的表达,可能与β-catenin及其下游蛋白c-myc表达下降有关。[结论]Wnt/β-catenin信号通路参与损伤心肌细胞的凋亡,骨髓间充质干细胞可抑制损伤心肌细胞的凋亡,其机制可能是通过Wnt/β-catenin途径及其下游的c-myc对p53的调控而实现的。