论文部分内容阅读
干巴菌(Thelephora ganbajun)又叫绣球菌、对花菌、马牙菌等,属于真菌门、层菌纲、非褶菌目、革菌科、革菌属,其营养丰富,味道鲜美,是一种珍稀的野生药食两用菌,据研究表明,干巴菌含有多糖、多酚、蛋白质等生物活性物质,具有很高的营养保健价值。因此,本试验拟从下面三个方面探讨干巴菌多糖对酒精性肝损伤的保护作用。1、干巴菌多糖的提取、纯化及组分验证。本试验采用超声波辅助的水提醇沉法,运用单因素结合响应面试验,考察了液料比、提取温度、提取时间、超声功率对干巴菌多糖的提取效果,得到干巴菌粗多糖(CPTG)的最佳工艺条件,经Sevag法三次除蛋白后冷冻干燥得到干巴菌精多糖(RPTG),再经DEAE-Cellulose52离子交换柱和Sepharose 4B柱纯化得到干巴菌纯多糖(PPTG Ⅲ),用薄层层析及高效液相分析其组分。结果显示,CPTG的最佳提取工艺条件:液料比为38:1,提取时间为3 h,提取温度为89℃,超声功率为603 W,此时多糖得率达到5.96%;对PPTG Ⅲ进行紫外扫描,图谱显示其不含核酸和蛋白质;红外扫描PPTG Ⅲ表明多糖分子中含有吡喃环碳骨架等典型的多糖特征基团;采用TLC法及HPLC法对PPTG Ⅲ进行组分分析,表明干巴菌多糖是由半乳糖、木糖及少量葡萄糖聚合而成的杂多糖。2、从抗氧化角度探讨干巴菌多糖对酒精性肝损伤的改善作用。研究了干巴菌多糖清除自由基及提高体内抗氧化的能力。分别测定CPTG、RPTG的·OH、·O2-、DPPH自由基的清除率及还原力。结果表明:CPTG、RPTG均具有一定的抗氧化作用,且多糖纯度和浓度越高,抗氧化效果越好。通过建立小鼠急性肝损伤模型,研究RPTG对小鼠急性酒精性肝损伤的改善作用。小鼠被随机分为空白对照组、模型组、阳性对照组(150mg/kg.bw)、RPTG 各剂量组(100、200、400 mg/kg.bw)。每组 11 只,连续灌胃30天,第31天除空白对照组外,其余各组小鼠均灌以50%乙醇(12 mL/kg),建立小鼠急性肝损伤模型,12 h后,去除死亡小鼠,每组取10只小鼠,分别取眼球血并分离血清,脱臼处死,取小鼠肝脏测定各项抗氧化指标。结果表明:与模型组相比,RPTG各剂量组小鼠肝脏及血液中超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化酶(GSH-Px)活力及谷胱甘肽(GSH)含量明显上升,丙二醛(MDA)含量则明显下降,且与RPTG的浓度存在一定的剂量效应。其中高剂量组对小鼠肝脏中SOD、CAT活力和GSH含量的改善作用已达到阳性对照组水平,对小鼠血液中GSH-Px活力改善及抑制MDA含量升高均达到了阳性对照组水平。提示,干巴菌多糖不仅具有较好的体外抗氧化能力,还可增强机体的抗氧化酶活性,抑制脂质过氧化,对酒精性肝损伤有一定的保护作用。3、以RPTG为试验材料,通过建立小鼠急性酒精肝损伤模型,测定小鼠肝脏及血清中谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、甘油三酯(TG)水平,对小鼠肝脏进行石蜡切片及超微结构的观察。结果显示:与模型组相比,RPTG各剂量组小鼠肝脏及血液中ALT、AST、TG水平均显著降低(P<0.01),且高剂量组小鼠血清ALT、AST活力已达到阳性对照组水平。小鼠病理切片显示:模型组小鼠肝组织结构紊乱,中央静脉扩大且严重变形,肝细胞片状坏死、炎细胞浸润现象严重,而RPTG各剂量组对小鼠肝索紊乱、肝细胞炎症等病症均有不同程度的改善,且随剂量的增加改善的程度越明显;肝细胞超微结构显示:模型组小鼠肝细胞的细胞核及线粒体变形严重,核膜不规则,线粒体嵴模糊不清,内质网扩张现象严重,核糖体颗粒脱落,视野内出现大量脂滴,而RPTG各剂量组对小鼠肝组织内核膜皱缩、线粒体畸形、内质网肿胀、脂滴聚积等病症均有不同程度的改善,其中高剂量组改善的程度最明显。结果提示,RPTG可有效降低肝组织的损伤程度,对酒精所致急性肝损伤小鼠有明显的保护作用。