云南乳菇属真菌系统发育研究

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乳菇也被称为奶浆菌,泛所有指伞菌目(Agaricales)红菇科(Russulaceae)乳菇属(Lactarius)的真菌种类。其典型特征是子实体在受损伤时产生乳汁。乳菇是云南省最常见大型真菌之一,种类众多,产量大,其中大部分种类可食,是市场上常见贸易真菌,但亦有部分种类不可食用。正确认识物种及其系统发育关系是可持续利用野生生物资源的基础,但乳菇属种类众多,且乳菇属形态特征变异较大,易受环境的影响,因此目前基于形态学特征为基础的经典分类可能是不准确的,有必要进行深入的研究。分子生物学方法是目前大型真菌鉴定和系统发育分析最常用可靠的方法,可以和经典分类相互映证,并对经典分类进行补充和修订。本论文采用克隆测序法对采集自云南省不同地域的41个乳菇样品的ITS序列和LSU序列进行测序;依据两个序列的测序结果用Blast对样品进行了分子鉴定;运用最大似然法和邻接法构建系统发育树,系统发育树包括ITS序列和LSU序列分别构建和联合构建。论文研究结果如下:1、分子鉴定结果表明:样品SP15、SP27、SP28 LSU序列鉴定支持率较高,依次为皱盖乳菇、绒白乳菇、橙红乳菇。SP18、SP19、SP25依据ITS鉴定结果重新命名为红皱盖乳菇、卡西亚乳菇、稀褶乳菇。SP1、SP1、SP6、SP37形态学鉴定与分子鉴定结果一致都为松乳菇,SP37 ITS序列比对结果也是松乳菇;红汁乳菇5个分别是SP3、SP4、SP5、SP7、SP17;SP24、SP39依据形态学及分子鉴定结果,为多汁乳菇;SP33、SP40综合形态学鉴定结果及ITS比对结果为毛脚乳菇。样品SP21、SP41分子鉴定结果显示为粉绿乳菇近似种;SP20、SP36 ITS序列支持度高,为粉绿乳菇。SP8、SP9根据比对结果为欧姆斯乳菇。部分样品经比对显示不属于乳菇属真菌,经ITS序列鉴定,SP23、SP35是大白菇,隶属于红菇属;SP13、SP32为红菇属真菌,但不能准确命名其种名;SP29、SP30也无法确定其种名。在2个序列中,LSU较为保守,不适合单独以该序列对乳菇属真菌进行鉴定;在NCBI数据库中ITS序列数据比LSU序列数据更为完善,且变异位点较多,依据ITS序列所构建的系统发育树中各样品的汇组与分子鉴定结果基本相同,因此建议在进行单片段分析时可将ITS序列作为乳菇属真菌系统发育研究以及鉴定的主要片段。2、分子系统学研究结果表明:基于单基因序列构建的系统发育树各有不同,其中基于LSU序列的发育树与鉴定结果相差较大,基于ITS序列的发育树大部分与鉴定结果相符,两个序列合并后构建系统发育树的可信度大有提升。在两序列系统树中,红汁乳菇(SP3-7、SP7、SP17)、稀褶乳菇(SP11和SP25)、淡黄乳菇(SP12、SP22)、毛脚乳菇(SP33、SP40)粉绿乳菇(SP20、SP36)、粉绿乳菇近似种(SP21、SP41)的聚类结果与鉴定结果一致;松乳菇样品中除SP34、SP37外都汇聚在一个组中,且支持率相对较高。SP13号样品在鉴定时只能确定属于红菇属真菌但并不能准确命名其种名,但是根据几个发育树分析其属于大白菇的可能性较大,无论是基于哪个序列运用何种构树法该样品总是和SP23(大白菇)聚成一组。松乳菇样品里SP1、SP2、SP6号样本总是和两个横断山乳菇样本汇聚成组,且每次的支持率都高于70%;SP29和SP37号样品、SP34和SP28号样品(SP34、SP37为松乳菇)虽属于不同种的乳菇,但每次聚类时都处于同一分组。SP15号样形态学鉴定结果为多汁乳菇,但经分子鉴定结果SP15样品为皱盖乳菇,在各个不同系统发育树中却又每次都能和SP24(多汁乳菇)合为一组;其余两个多汁乳菇样品(SP38、SP39)每次都归为一类。SP10(毛乳菇)SP27绒白乳菇虽采集地不同,但两个样本之间可能存在一定的同源性,在上述各种不同发育树中都能汇聚。SP14窄环乳菇SP19卡西亚乳菇依据不同构树法所得的汇组结果也个不相同。SP18、SP30每次分组也都能聚集在一起。SP15,SP30可能是因为种间差异较大,在各个发育树中都未与其他样品汇集成组。
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