病毒感染是目前许多传染病和非传染病甚至癌症的病因,严重危害人们的生命和健康。 病毒引起的疾病感染传播迅速,难以控制。 目前对病毒的防治主要是研制抗病毒疫苗和抗病毒药物。抗病毒药物主要是针对病毒特异性的核酸或蛋白质,如核苷酸类似物或蛋白酶抑制剂,但病毒进化后会迅速产生耐药性。 目前针对宿主细胞翻译系统的抗病毒药物很少。 本研究以酵母病毒嗜杀系统为筛选机理,针对程序性-1核糖体移码的机制建立抗病毒药物的筛选模型。 以嗜杀病毒系统的嗜杀酵母T158c/14a、L-A病毒和M1卫星病毒为基础,利用平板培养法和-1移码效率测定体系建立了一个抗病毒药物筛选模型。 平板培养法选择了美蓝为指示剂,磷酸.柠檬酸缓冲系统,温度为22℃,pH值为4.7,嗜杀酵母T158c/14a的浓度为108cfu/mL。将含有-1移码信号序列和双荧光素酶报告基因的质粒(pJD375和pJD376)转化至酿酒酵母YS58,建立了-1移码效率效率的测定体系。 利用该模型对具有抗病毒、抑制病毒复制、调节免疫功能作用的19、种中草药进行筛选,发现金银花提取液能够抑制酵母的嗜杀作用并改变-1移码效率。金银花提取液改变了嗜杀酵母T158c/14a的表型,使其出现红色的单菌落,且这种单菌落失去嗜杀作用,丢失L-A病毒和M1病毒。金银花提取液浓度为1.0 mg/mL时移码效率达到10.68％,并通过实时荧光定量PCR测定-1移码报告基因的mRNA表达量不变。 金银花提取液的主要成分是绿原酸,HPLC检测其浓度可达到2.804mg/mL。分别通过平板培养法和-1移码测定体系验证绿原酸对T158c/14a嗜杀作用和-1移码效率的影响,结果显示绿原酸对嗜杀效果没有明显的抑制作用且不能改变-1移码效率。金银花提取液对T158c/14a嗜杀作用的抑制效果和-1移码效率的改变是由其他活性成分引起。