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放线菌生产类胡萝卜素相对于酵母,光和细菌有其独特的优势,本文对一株产类胡萝卜素的放线菌菌株进行鉴定,优化其产类胡萝卜素的培养基和发酵条件,并对发酵后菌液的匀浆破胞工艺进行了研究。
首先,通过16SrDNA测序和生理生化鉴定的方法对一株产类胡萝卜素的菌株HBUT-Y进行了鉴定和营养特性的研究。16SrDNA片段比对的结果表明菌株HBUT-Y与戈登氏(gordonia)菌的同源性高达99%。系统发育树分析,发现该菌株与戈登氏(gordonia)菌属的4株菌的亲缘关系最近,结合该菌的生理生化实验初步鉴定确定该菌株为大西洋戈登氏菌(gordonia alkanivorans)。其生长特性为有光与无光条件下均能生长,但在有光条件下产生的色素量比无光条件下高出40%,在厌氧条件下不能生长。菌株培养时间为6天,即144h。该菌株的色素提取液在465nm~490nm之间吸收强烈,在477nm处有最大吸收峰。
其次,对该株戈登氏菌产类胡萝卜素的发酵培养基和培养条件进行了研究。采用单因素设计的方法筛选最适宜发酵产类胡萝卜素的氮源、碳源,采用Plackett-Burman设计筛选出对发酵产胡萝卜有重要影响的无机盐类。结果表明戈登氏菌发酵产类胡萝卜素最适碳源为蔗糖,最适氮源为KNO3。MgSO4,FeSO4这两种无机盐对菌株产类胡萝卜素具有显著性的影响。最终确定发酵培养基为:蔗糖20g/L,硝酸钾4g/L,MgSO40.4g/L,FeSO415mg/L,KH2PO42g/L,Na2HPO43g/L,柠檬酸钠2g/L。最佳发酵条件为:发酵温度为28℃,发酵液的初始pH值为7.5,摇床转速为220r/min。在此培养基和最佳发酵条件下,戈登氏菌产类胡萝卜的量可达到605mg/L,比最初所选用的培养基的类胡萝卜素产量提高了212.5%。
最后,对菌体进行高压匀浆破胞研究。发现在高压匀浆破碎戈登氏菌体细胞过程中,匀浆压力、匀浆次数及悬浮液体系是主要影响破胞主要因素。通过实验确定了菌体细胞高压匀浆破碎的工艺:进料菌液密度为60g/L左右,用磷酸缓冲液悬浮,悬浮液与菌液比例为1∶1,在200MPa压力,匀浆次数为一次,匀浆过程中温度控制为4℃以下。
首先,通过16SrDNA测序和生理生化鉴定的方法对一株产类胡萝卜素的菌株HBUT-Y进行了鉴定和营养特性的研究。16SrDNA片段比对的结果表明菌株HBUT-Y与戈登氏(gordonia)菌的同源性高达99%。系统发育树分析,发现该菌株与戈登氏(gordonia)菌属的4株菌的亲缘关系最近,结合该菌的生理生化实验初步鉴定确定该菌株为大西洋戈登氏菌(gordonia alkanivorans)。其生长特性为有光与无光条件下均能生长,但在有光条件下产生的色素量比无光条件下高出40%,在厌氧条件下不能生长。菌株培养时间为6天,即144h。该菌株的色素提取液在465nm~490nm之间吸收强烈,在477nm处有最大吸收峰。
其次,对该株戈登氏菌产类胡萝卜素的发酵培养基和培养条件进行了研究。采用单因素设计的方法筛选最适宜发酵产类胡萝卜素的氮源、碳源,采用Plackett-Burman设计筛选出对发酵产胡萝卜有重要影响的无机盐类。结果表明戈登氏菌发酵产类胡萝卜素最适碳源为蔗糖,最适氮源为KNO3。MgSO4,FeSO4这两种无机盐对菌株产类胡萝卜素具有显著性的影响。最终确定发酵培养基为:蔗糖20g/L,硝酸钾4g/L,MgSO40.4g/L,FeSO415mg/L,KH2PO42g/L,Na2HPO43g/L,柠檬酸钠2g/L。最佳发酵条件为:发酵温度为28℃,发酵液的初始pH值为7.5,摇床转速为220r/min。在此培养基和最佳发酵条件下,戈登氏菌产类胡萝卜的量可达到605mg/L,比最初所选用的培养基的类胡萝卜素产量提高了212.5%。
最后,对菌体进行高压匀浆破胞研究。发现在高压匀浆破碎戈登氏菌体细胞过程中,匀浆压力、匀浆次数及悬浮液体系是主要影响破胞主要因素。通过实验确定了菌体细胞高压匀浆破碎的工艺:进料菌液密度为60g/L左右,用磷酸缓冲液悬浮,悬浮液与菌液比例为1∶1,在200MPa压力,匀浆次数为一次,匀浆过程中温度控制为4℃以下。