研究背景及目的:既往研究显示,血管平滑肌细胞(Vascular smooth muscle cell,VSMC)由中膜迁移至内膜并异常增殖与血管再狭窄及所致相关疾病的发生、发展关系密切。相关临床及基础研究均提示补阳还五汤是防治冠状动脉粥样硬化性心脏病及血管再狭窄的有效药物,木犀草素(Luteolin)是补阳还五汤红花中所含黄酮类化合物之一,具有多种心血管保护作用,但其具体作用机制尚未完全阐明。本研究旨在通过体内外实验探索及验证木犀草素通过转化生长因子 β 受体 1(Transforming growth factor β receptor 1,TGFBR1)抑制 VSMC 增殖、迁移及血管内膜增生的作用,进一步明确补阳还五汤发挥防治血管再狭窄及相关疾病的物质基础,为中医中药防治血管再狭窄及所致相关疾病的临床应用提供科学依据。方法:体外实验:用不同浓度木犀草素(10,20,40μM)处理大鼠胸大动脉血管平滑肌细胞(A7r5)和人主动脉血管平滑肌细胞(HASMC)后,采用MTS、EdU染色、Transwell、细胞划痕实验、Western blot等实验方法检测木犀草素对VSMC增殖、迁移及TGFBR1信号通路激活的影响。并进一步通过分子对接及分子动力学模拟、表面等离子共振技术、TGFBR1体外酶活性等实验验证木犀草素与TGFBR1间的相互作用;使用过表达TGFBR1腺病毒(Ad-TGFBR1)在A7r5和HASMC中过表达TGFBR1,构建过表达TGFBR1细胞模型,进一步验证TGFBR1在木犀草素抑制VSMC增殖及迁移中的作用。体内实验:结扎小鼠左侧颈总动脉模拟损伤血管内膜增生,采用HE染色及免疫组化等实验技术检测木犀草素对损伤血管内膜增生的抑制作用及对TGFBR1的调控。并进一步通过构建过表达TGFBR1腺相关病毒载体,在血管组织中制备过表达TGFBR1基因的左侧颈总动脉结扎内膜增生模型,验证TGFBR1在木犀草素抑制损伤血管内膜增生中的作用。结果:体外实验:与对照组比,木犀草素能浓度依赖性的抑制VSMC增殖、迁移及TGFBR1信号通路的激活(P<0.05);过表达TGFBR1后,木犀草素抑制VSMC增殖、迁移及TGFBR1信号通路激活的作用被部分抑制(P<0.05)。体内实验:与模型组比,木犀草素能抑制损伤血管内膜增生及TGFBR1信号通路的激活(P<0.05);过表达TGFBR1后,木犀草素抑制损伤血管内膜增生及TGFBR1信号通路激活的作用被部分抑制(P<0.05)。此外,分子对接及分子动力学模拟、表面等离子共振技术、TGFBR1体外酶活性等实验亦提示:木犀草素可直接靶向作用TGFBR1,可作为潜在的TGFBR1抑制剂。结论:木犀草素可通过抑制TGFBR1信号通路的激活,抑制VSMC增殖、迁移及血管内膜增生,进而发挥防治血管再狭窄及相关疾病的作用。