谷氨酰胺对生长猪健康状况的影响研究及FUT1基因多态性分析

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本研究选用杜长大三元杂为试验材料,就不同添加量的谷氨酰胺对杜长大生长性能、免疫性能、猪瘟和口蹄疫抗体水平、肠道形态发育的影响进行比较分析,并进行杜长大三元杂抗病基因FUT1多态性分析,旨在揭示杜长大不同谷氨酰胺水平下的抗病力差异的免疫学机理,为利用免疫指标进行免疫营养的研究奠定基础,确定谷氨酰胺的最佳添加剂量;为健康养猪从营养免疫角度来寻找更健康、更安全的饲养管理方法和抗生素替代思路提供依据。本试验研究分为四个部分第一部分:谷氨酰胺对杜长大生长性能与免疫性能影响的研究。选择29+2日龄生长发育良好的杜长大保育猪270头,将试验猪随机分为5个组,每个组3个重复(栏),每个重复18头猪,公母比例接近,基础日粮为乳二料。试验1-3组分别在基础日粮中添加0.5%、1.0%、1.5%的Gln,试验4组在基础日粮中添加400g/t的阿莫西林,试验5组为对照组,饲喂基础日粮。试验期为90天。试验结果表明:(1)生长性能:谷氨酰胺及抗生素对29d-75d阶段的生长性能影响差异不显著(P>0.05),但对76d-93d阶段的平均日增重、平均日采食量、料重比影响差异极显著(P<0.01),Gln最佳添加量为1.0%。(2)生理指标:添加1.0%Gln能提高红细胞数、红细胞压积、血小板等生理指标。0.5%Gln能显著增加白细胞总数、淋巴细胞数(P<0.05),极显著增加淋巴细胞比率(P<0.01)。(3)生化指标:谷氨酰胺及抗生素对杜长大天门冬氨酸转移酶、ALT/GOT、碱性磷酸酶、胆固醇、高密度脂蛋白胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇的影响差异不显著(P>0.05),而对尿素氮、谷丙转氨酶、空腹血糖的影响差异极显著(P<0.05)。(4)免疫指标:谷氨酰胺及抗生素对总蛋白、球蛋白、免疫球蛋白M、免疫球蛋白A的影响差异不显著(P>0.05),但对白蛋白、白/球比值、免疫球蛋白G、补体C3、补体C4的影响差异显著(P<0.05)。基础日粮+1.0%Gln组总蛋白、白蛋白、白球比和补体C3最高。(5)抗氧化指标:Gln可显著降低血清中MDA的含量(P<0.05),MDA含量、SOD活力、GSH-PX活力与Gln的添加量呈负相关,Gln每增加0.5%,MDA含量减少1.72%-3.89%。提高T-AOC上,1.0%Gln是最佳添加量。(6)酶免指标:谷氨酰胺可显著提高IL-12含量(P<0.05),以1.0%Gln最佳,能极显著提高IFN-γ和CD8含量(P<0.01),分别以1.0%Gln和0.5%Gln的添加量最佳,能提高CD4/CD8比值,以0.5%Gln效果较好。(7)免疫器官指数:谷氨酰胺能提高免疫器官指数,尤其扁桃体指数显著高于阿莫西林组20.75%(P<0.05),扁桃体重极显著高于阿莫西林组35.29%(P<0.01)。Gln的最佳添加量为1.0%,能有效替代抗生素。第二部分:谷氨酰胺对杜长大猪瘟、口蹄疫抗体水平及变化趋势的影响研究。试验设计同第一部分。各组在40日龄、63日龄分别进行猪瘟疫苗首免和二免,首免后第7d、15d、22d,二免后第7d、14d、21d、28d前腔静脉采血,用于猪瘟抗体检测。在48目龄时,免疫口蹄疫疫苗,之后第7d、15d、22d、29d前腔静脉采血,用于猪口蹄疫病毒O型(FMDV-O)抗体检测。结果表明,猪瘟首免2、3周后,抗生素组猪瘟抗体水平,出现迅速下滑趋势,而0.5%Gln组和1.5%Gln组则出现上升趋势,最高达到0.713,且猪瘟二免后,Gln组OD值差异显著(P<0.05)。二免第3周,1.5%Gln组猪瘟抗体水平达最高峰且上升幅度最大,高于抗生素组22.2%。口蹄疫免疫第3周抗体水平到达最高峰,以0.5%Gln组效果最好。谷氨酰胺能正面影响猪瘟抗体、口蹄疫抗体的产生与维持时间。第三部分:研究谷氨酰胺对杜长大小肠形态学发育程度的影响。试验设计同第一部分。在试验结束后,每组每重复选1头健康猪只屠宰,采集十二指肠、空肠和回肠肠段样本,用于形态学观察。结果表明,基础日粮中添加Gln能显著改善小肠形态学发育程度(P<0.05)。1.5%Gln组对提高十二指肠的绒毛长度、绒毛宽度能达到显著水平(P<0.05);0.5%Gln组对降低空肠的隐窝深度能达到显著水平(P<0.05),各Gln组隐窝深度随Gln添加量的增多呈线性下降趋势。1.0%Gln组能增加回肠绒毛长度,1.5%Gln能降低回肠的隐窝深度。说明Gln能有效改善抗生素对小肠形态学发育的损伤或抑制作用,取代抗生素。第四部分:杜长大三元杂FUT1基因多态性分析。本研究应用PCR和PCR-RFLPs技术检测并分析杜长大78个样品的抗病基因(FUT1)多态性分布。结果表明,杜长大FUT1基因以GG型基因频率最高,高于AG型43.58%,显示出GG>AG>AA趋势。在本检测中,没有检测到AA基因型,而地方猪种含有较高的A基因频率,或者只含有AA型。所以,我们应把含有FUT1基因的G等位基因的个体予以保留,利用地方猪种的优势基因A,培育健康度高的猪种。
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