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乙型肝炎病毒（HBV）为一种流行十分广泛的部分双链DNA病毒，是导致急慢性肝炎和肝细胞癌变的致病因子，严重危害了人类公共卫生安全。目前，全世界有将近20亿人感染过HBV，其中慢性感染者约为3.5亿。中国HBV感染率为7.18%，大约有1亿人为HBV感染者。慢性HBV感染者并不表现有任何临床症状，但具有较强的传染性并有可能发展为肝硬化及肝癌等严重疾病。因此检测筛查HBV是否感染、感染后的治疗效果评价以及免疫水平监测是一项艰巨的工程。目前以检测HBsAg为阳性作为HBV感染的标志。然而在慢性感染的病人中有一部分人群针对HBsAg产生的细胞免疫很弱，而且有的几乎检测不到抗原及相应的抗体。这部分HBsAg阴性的HBV感染者可以用核酸定量的检测方法检出，这就需要有可靠的HBV DNA检测技术。而在急性HBV感染的病人中几乎都能够针对HBsAg、HBcAg产生强烈的细胞免疫响应。在体外检测T细胞免疫响应需要具有抗原投递功能的载体将抗原递呈给特异性T细胞。本研究中，为了开发高特异性、高灵敏性的HBV DNA荧光定量PCR检测试剂盒及研究HBV感染者机体T细胞免疫水平，我们设计了以下两部分试验。第一部分：针对HBV不同基因型A～H高度保守区设计4对引物(HBsF1/HBsR1、HBsF2/HBsR2、HBxF/HBxR、HBcF/HBcR)和相对应的4条Taqman探针（HBsP1、HBsP2、HBxP、HBcP）。通过用4对引物对HBV DNA扩增并与T载体连接后，构建了pMD18-T-HBs1、pMD18-T-HBs2、pMD18-T-HBx和pMD18-T-HBc4种重组质粒，并计算拷贝数后作为荧光定量PCR检测HBV DNA方法的工作标准品。经荧光定量PCR检测分析发现，pMD18-T-HBx和pMD18-T-HBc在1.0×103copies/mL～1.0×109copies/mL时，标准曲线的线性范围相关系数R2为0.99以上，扩增效率为95%～105%，较pMD18-T-HBs1、pMD18-T-HBs2的线性范围宽，扩增效率高。以pMD18-T-HBc为工作标准品对荧光定量PCR检测HBV DNA的方法学进行评价，批内精密度为0.12%～1.01%，批间精密度为1.99%～7.01%。该方法最低检出限为125copies/mL，比市售同类商品检出限低4～8倍。对HBV核酸国家标准品中阳性标准品、阴性标准品符合率均为100%，对国家线性标准品检测的线性相关系数R2为0.9992。对不同类型的血样检测发现，经EDTA抗凝的血浆检测值要高于血清检测值，肝素钠抗凝的血浆检测值效果最差。对用试剂盒和热裂解提取血浆HBV DNA检测发现，试剂盒提取病毒载量较低的样品时，效果要好于热裂解法。对102份HBsAg（+）血浆检测并与HBV商品化检测试剂盒比较分析，总符合率为94.1%，相关系数R2为0.951。第二部分：将含有抗原投递系统LFn的核心抗原肽库重组质粒转化入表达菌株E.coli BL21后，经原核表达、IMAC亲和层析、QFF离子交换层析、超滤等方法进行纯化、去内毒素、浓缩并更换缓冲液处理。所得蛋白对HBV感染者全血体外刺激，并经ELISA检测IFN-γ含量。分析发现,对于经核心肽库抗原刺激的血浆中IFN-γ含量，病毒载量大于105copies/mL组明显高于病毒载量小于105copies/mL组。HBsAg（+）、HBeAg（+）、HBcAb（+）组明显高于HBsAg（+）、HBeAb（+）、HBcAb（+）组。经T检验分析，以上两组IFN-γ含量差异显著。