脂肪酶是一种应用较为广泛的工业酶制剂，特别是在生物柴油的生化生产工艺中作为关键催化剂，有重要的应用价值。在工业生产上，脂肪酶主要是通过产脂肪酶的微生物发酵生产。不同微生物产脂肪酶的能力和所产脂肪酶的特性各不相同。脂肪酶的生产菌株有的从自然环境中筛选和诱变获得，也有的是利用基因工程技术构建的工程菌，而上程菌具有更大的应用潜力和优势。枯草芽孢杆菌产生的脂肪酶是已知分子量最小的脂肪酶，它的作用底物范围广，具有优良的酶学特性，有较大的潜在上业应用价值。构建基因工程菌，实现枯草芽孢杆菌脂肪酶的工业发酵生产，是目前生物柴油技术开发的迫切需要。 本文就构建过量表达枯草芽孢杆菌脂肪酶的工程菌进行了初步研究。对中性红油脂培养基进行了改进，根据菌落在中性红油脂培养基上生长的颜色变化，定性检测产脂肪酶的菌株，为快速筛选表达脂肪酶的菌株提供了有效的方法。以商品脂肪酶为标准，以橄榄油为底物，优化了碱滴定法测定脂肪酶活力的反应体系和反应条件，得到了可靠的酶活测定方法。以大肠杆菌.枯草芽孢杆菌穿梭质粒pUBC19和pHP13为载体，分别连接了枯草芽孢杆菌强启动子P43和veg，以及其它表达元件，构建了以P43和veg为启动子的两类表达载体。分别用这两类表达载体连接B.subtilis 168的脂肪酶基因，得到4个不同的重组质粒pUBCPL，pUBCVL，pHPPL和pHPVL。将它们分别转化到lipA基因缺陷的受体菌B.subtilisTZ10中，获得4种转化菌株。通过在中性红油脂平板上的颜色对比，初步确定B.subtilis TZ10/pUBCPL 表达脂肪酶的效果最好。