论文部分内容阅读
背景:支气管哮喘是由嗜酸性粒细胞、肥大细胞和T淋巴细胞等多种炎性细胞和细胞组分参与的气道慢性炎症性疾病。研究证实,支气管哮喘的发病与Th1/Th2失衡有着密切关系,Th2细胞活化亢进是哮喘发病的重要机理。目前对哮喘防治重点已由单纯抗呼吸道痉挛转向抗炎治疗,尤其如何促进Th0型细胞向Th1转化,抑制Th2细胞从而控制哮喘发展。现有资料发现多种转录因子或细胞内信号途径与Th细胞分化有关。其中转录因子GATA-3和T-bet在其中发挥着重要作用。有人认为T-bet与GATA-3的平衡决定了T细胞在黏膜免疫的命运,决定了Th1/Th2平衡的稳定性。卡介苗(BCG)作为非特异性免疫反应调节剂,能抑制Th2型免疫反应而上调Th1型免疫反应,减轻气道炎症反应。但卡介苗是否调节转录因子T-bet与GATA-3的平衡来减轻气道炎症尚未见报道。目的:通过建立小鼠哮喘模型,给小鼠分别进行预防和治疗性接种BCG,观察BCG对哮喘小鼠T淋巴细胞转录因子T-bet蛋白与GATA-3蛋白表达的影响并比较预防和治疗性接种的差异,探讨其可能的机制。方法:32只雄性昆明小鼠随机分成正常对照组(A组),哮喘模型组(B组),BCG预防组(C组),BCG治疗组(D组)。通过卵清蛋白致敏建立哮喘模型。观察4组小鼠的一般情况;肺泡灌洗液的细胞分类;肺组织的病理切片;用免疫组化半定量分析法检测肺组织中T-bet和GATA-3蛋白的表达。结果:1.BALF检查显示:哮喘组(B组)与对照组(A组)比较,BALF中白细胞总数及嗜酸性粒细胞比例均明显升高(P＜0.01)。BCG接种各组与哮喘组(B组)比较均能明显降低BALF中白细胞总数及嗜酸性粒细胞比例(P＜0.01),接种两组之间无显著差异(P＞0.05)。2.病理检查显示:病理学HE染色发现:对照组(A组)小鼠肺内几乎无炎性细胞浸润;而哮喘组(B组)小鼠肺内可见大量炎性细胞和浸润,其炎性细胞浸润程度与对照组(A组)比较明显增加(P＜0.01)。BCG接种后,炎性细胞浸润程度较哮喘组(B组)明显降低(P＜0.01),但仍然比对照组(A组)严重(P＜0.01)。3.免疫组化结果显示:哮喘组(B组),卡介苗预防组(C组),卡介苗治疗组(D组)的T-bet表达量显著低于对照组(A组),其差异均有统计学意义(P均＜0.01);卡介苗预防组(C组),卡介苗治疗组(D组)的T-bet表达量与哮喘组(B组)比较明显增多,差异均有统计学意义(P均＜0.01)。卡介苗接种两组之间的比较差异无统计学意义(P＞0.05)。哮喘组(B组),卡介苗预防组(C组),卡介苗治疗组(D组)的GATA-3表达量显著高于对照组(A组),其差异均有统计学意义(P均＜0.01);卡介苗预防组(C组),卡介苗治疗组(D组)的GATA-3表达量与哮喘组(B组)比较明显减少,差异均有统计学意义(P均＜0.01);卡介苗接种两组之间的比较差异无统计学意义(P＞0.05)。4.相关分析显示哮喘组(B组)小鼠转录因子T-bet蛋白表达量与气道炎症呈显著负相关(r=-0.954 P＜0.01),与肺泡灌洗液中嗜酸性粒细胞数百分比呈显著负相关(r=-0.900 P＜0.01);哮喘组(B组)小鼠转录因子GATA-3蛋白表达量与气道炎症呈显著正相关(r=0.954 P＜0.01),与肺泡灌洗液中嗜酸性粒细胞数百分呈显著正相关(r=0.811 P＜0.05);哮喘组(B组)小鼠转录因子T-bet蛋白表达量与转录因子GATA-3蛋白表达量呈显著负相关(r=-0.981,P＜0.01)。结论:1.通过OVA致敏激发成功的造成了哮喘的小鼠模型,在支气管哮喘模型中,转录因子T-bet和GATA-3失衡表达,表现为T-bet低表达,GATA-3高表达,T-bet表达量与GATA-3表达量呈负相关。T-bet和GATA-3蛋白表达量分别与气道炎症呈直线相关,T-bet和GATA-3的失衡表达很可能是哮喘气道炎症形成的重要原因之一。2.BCG不仅能够增加转录因子T-bet蛋白的表达,同时能够抑制转录因子GATA-3蛋白的表达。因此BCG可能通过纠正T-bet和GATA-3失衡表达来增加Th1细胞的分化,抑制Th2细胞的过度分化,调节Th1/Th2失衡,从而可以减轻哮喘的气道炎症反应。