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目的:本课题旨在探索中性粒细胞来源的外泌体(polymorphonuclear-derived exosome,PMN-Exo)在诱导骨髓间充质干细胞(bone marrow stromal cell,BMSC)、人脐静脉血管内皮细胞(human umbilical vein endothelial cell,HUVEC)表达成血管相关因子及促进裸鼠皮下异位血管生成的作用。方法:采用髓腔冲洗法获取C57小鼠骨髓,通过免疫磁珠法提取骨髓中PMN,并采用流式细胞术(flow cytometry,FCM)对其进行鉴定。采用髓腔冲洗法从人颌骨块中提取BMSC并通过FCM进行鉴定,将PMN分别与BMSC、HUVEC共培养20 h后,采用划痕实验观察细胞迁移能力,共培养12 h后,观察HUVEC成管效果,共培养24 h后,采用定量聚合酶链反应(quantitative polymerase chain reaction,qPCR)、western blot检测成血管相关因子VEGF、PDGF表达水平;PMN培养24 h后收取上清,用超速离心获得PMN外泌体,并通过透射电镜(transmission electron microscope,TEM)观察其形态结构,纳米颗粒跟踪分析技术(nanoparticle tracking analysis,NTA)检测其粒径、浓度,检测标志物CD9,CD81,TSG-101,对外泌体进行鉴定。通过Dil标记PMNExo,采用激光共聚焦显微镜(confocal laser scanning microscopy,CLSM)观察其内吞效果。分PBS组、PMN-Exo组,PMN-Exo分别加入BMSC、HUVEC中20 h,采用划痕实验观察其迁移能力,12 h后,观察HUVEC成管效果,加入24 h后,通过Ed U法检测其增殖能力,5 d后采用qPCR、western blot检测成血管相关因子VEGF、PDGF表达水平;低温构建PMN-Exo/水凝胶复合物,并采用NTA检测PMN-Exo滞留效果。将PMN-Exo/水凝胶混合物无菌植入于裸鼠背部皮下,1周后取材,通过HE染色、CD31染色观察其体内成血管效果。结果:成功提取、鉴定PMN及BMSC。划痕实验结果表明:较无PMN组,PMN组BMSC、HUVEC迁移能力显著上升。加入PMN后,HUVEC成管效果显著增强。qPCR、western blot结果表明:加入PMN组BMSC、HUVEC中成血管相关因子VEGF、PDGF显著升高;基于以上结果,进一步提取PMN-Exo,从形态学、粒径分析、膜蛋白检测对其成功鉴定,并通过Dil染色验证其内吞效果。划痕实验结果表明:与PBS组相比,PMN-Exo组BMSC、HUVEC增殖、迁移能力显著上升。加入PMNExo后,HUVEC成管效果显著增强,成血管相关因子VEGF、PDGF显著升高;PMNExo在凝胶中存在滞留效果,HE染色、CD31染色结果同样显示:与PBS/水凝胶复合物组相比,PMN-Exo/水凝胶混合物组血管形成数量显著升高,成血管效果更佳。结论:1.中性粒细胞可有效增强h BMSC、HUVEC迁移能力以及HUVEC成管效果,促进h BMSC、HUVEC成血管相关因子表达。2.中性粒细胞来源外泌体可有效增强h BMSC、HUVEC迁移能力、增殖能力,以及HUVEC成管效果,促进h BMSC、HUVEC成血管相关因子表达。3.中性粒细胞来源外泌体/水凝胶复合物可有效提高体内血管生成能力,促进裸鼠皮下异位血管新生。