生殖细胞作为有性生殖生物遗传信息在世代间传递的关键载体,对个体的生殖发育起着不可替代的作用。作为雄性生殖细胞产生的基础,精子发生是一个持续进行的,多步骤的过程;其中,精原干细胞作为成年男性体内唯一的生殖干细胞库,对于不断产生生殖细胞,维持生育力是不可或缺的。然而,全世界15%不孕不育患者中,男性因素约占50%,更糟糕的是近些年男性生殖力持续降低。因此,能够体外诱导产生生殖系细胞对于生殖发育基础研究及治疗男性不育的临床应用均具有重要意义。本课题一方面在完善已有无滋养层细胞,无动物源性蛋白的体外诱导生殖细胞体系的过程中,证明诱导而来的类精原干细胞有与体内精原干细胞类似的向曲细精管基底膜迁移的特性;同时,发现NANOS3基因对这些类精原干细胞的生成至关重要。另一方面,该研究检测发现诱导生成了高表达PLZF的类精原干细胞,并筛选出一套分析分选方案,可用于由多能干细胞诱导而来的类精原干细胞的分离纯化。此方案证实这些类精原干细胞表现为Ep-CAM阴性,TNAP阳性,CD90阳性,将Ep-CAM-/TNAP+群体分选出来进行体内移植,证实这群细胞具有向曲细精管基底膜迁移的功能。该分离纯化方案为日后类精原干细胞的分析分选及长期扩增培养奠定了良好的理论和实验基础。