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TCC52(Testis-Cancer-Centrosome related protein52KD)是本实验室在前期研究中心体蛋白质组学中发现的新中心体蛋白。因其在正常组织中限制性表达而在肿瘤和睾丸组织中高表达,且在多种肿瘤病人血清中具免疫原性同时也被鉴定为新的癌睾(CT)抗原。本实验室前期的研究显示TCC52 RNAi后明显增加分裂期细胞的多纺锤体,多中心体和多核的现象,显著抑制肿瘤细胞体内外增殖能力,并增强了肿瘤细胞对阿霉素诱导凋亡的敏感性。而TCC52的过表达则增强了肿瘤细胞体内外增殖能力和肿瘤细胞对阿霉素诱导凋亡的耐受性。 为了进一步探索TCC52在肿瘤细胞中发挥作用的机制,采用GST-pull down技术以及Blue-Native非变性凝胶电泳技术对TCC52可能参与的蛋白复合体或者相互作用蛋白进行了检测。经过SDS-PAGE以及考马斯亮蓝染色后,对可分辨的条带进行质谱鉴定,获得了一系列候选蛋白。从中选择HA-PKM2以及CCT2作为候选蛋白通过免疫共沉淀技术验证是否存在直接相互作用。结果显示CCT2与TCC52在细胞内具有直接相互作用,而PKM2没有检测到与TCC52直接的相互作用。 鉴于TCC52在肿瘤细胞中有特异性的高表达,并且CT抗原长期以来被寄予可作为肿瘤干预靶点的期望,选择对肿瘤细胞增殖有抑制作用的药物和因子处理细胞,以确定TCC52对肿瘤细胞增殖及对抗增殖药物的影响。紫杉醇是被广为使用的一种抗肿瘤药物。作为微管蛋白活性抑制剂,紫杉醇可以诱导和促进β微管蛋白Ⅲ的聚合和装配,干扰有丝分裂纺锤体的形成,将增殖细胞阻滞在G2/M期。文献报道采用双向电泳结合质谱技术,对卵巢癌紫杉醇敏感细胞和耐药细胞之间蛋白质组的差异进行比较分析所发现的差异蛋白中包含了CCT2及cofilinl、destrin、HSP-1、伴侣素相关蛋白等。提示TCC52可能与肿瘤细胞的耐药性相关。进而通过紫杉醇加药实验证实TCC52 RNAi后,显著增强了肺癌细胞对紫杉醇作用的敏感性;反之过表达TCC52则在一定程度上增强了肿瘤细胞对紫杉醇作用的耐受性。另一方面,TGF-β是一种多效性细胞因子,据报道也可以引起肿瘤细胞的增殖抑制。采用外源加入TGF-β1的方式研究TCC52与TGF-β1之间的关系。实验显示TGF-β1在抑制了肿瘤细胞的增殖的同时,也抑制TCC52 mRNA的表达。但对TCC2蛋白水平未见影响。故推测TCC52可能并不直接参与TGF-β介导的细胞增殖抑制通路。本工作也给了我们一个乐观的提示,即如果真的能对TCC52或类似CT抗原进行干预并与紫杉醇等抗癌药物联用,可能会提高后者的疗效。