【摘 要】
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柑橘,为芸香科植物,品种繁多,酸甜可口,并且具有多种有益于人体健康的功能性物质,一直深受世界各国消费者的青睐。但是日常经验告诉人们,不宜过度摄入柑橘类水果,尤其是宽皮柑橘。很多人都经历过因为过量食用温州蜜柑等宽皮柑橘而出现的“上火”症状,通常呈现出面部红热、咽喉肿痛、口干舌燥以及发炎。“上火”现象不仅严重影响了人们的生活质量,也制约了柑橘产业的发展。本文在实验室前期研究的基础上,选取了容易诱发“上
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柑橘,为芸香科植物,品种繁多,酸甜可口,并且具有多种有益于人体健康的功能性物质,一直深受世界各国消费者的青睐。但是日常经验告诉人们,不宜过度摄入柑橘类水果,尤其是宽皮柑橘。很多人都经历过因为过量食用温州蜜柑等宽皮柑橘而出现的“上火”症状,通常呈现出面部红热、咽喉肿痛、口干舌燥以及发炎。“上火”现象不仅严重影响了人们的生活质量,也制约了柑橘产业的发展。本文在实验室前期研究的基础上,选取了容易诱发“上火”的宽皮柑橘品种温州蜜柑,作为实验材料,采用现代分离技术从果实中分离了促炎蛋白,利用小鼠髓样炎症细胞模型和生物信息学,评价分析了经过分离纯化所得的蛋白级分的促炎效果。主要研究结果如下:1.本实验制定了温州蜜柑果汁中可溶性总蛋白分离纯化的制备体系,利用液相色谱收集单一蛋白级分,最终得到纯度较高的蛋白级分,分别为命名为F1和F2。2.利用小鼠髓样树突细胞炎症模型,实时荧光定量PCR（Real-time PCR）以及Western-blot试验,从转录水平以及蛋白水平对蛋白的促炎效果进行评价,结果发现经过蛋白刺激的树突细胞中COX-2,TNF,IL6以及CXCL1的m RNA水平显著上调,级分F1和F2对促炎因子的转录上调比蜜柑果实总蛋白粗样（FTP）较为显著,其中F2调控炎症因子上调表达能力最为显著。再结合Western-blot实验,从蛋白水平分析,FTP、F1、F2都能诱发树突细胞显著的磷酸化。实验结果显示:FTP以及两个单一积分F1和F2,都具有较为明显的促炎效果。但是两个级分F1和F2与FTP相比,促炎效果较好,其中F2的促炎效果尤为显著。3.对促炎效果最为显著的F2进行质谱鉴定,通过对其保守结构域的分析和同源序列的对比,结果显示F2最有可能为延伸因子蛋白e EF-1A1以及类泛素蛋白NEDD,两者分别通过控制转录翻译和泛素化过程间接或直接地参与到炎症信号转录途径的调控中。
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