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背景:阿尔茨海默病是一种进行性发展的致死性的神经退行性病变,该病为年龄相关性疾病,年龄愈大,患该病的机率也会逐渐增加,到85岁时患病机率高至50%,随着社会老龄化步伐的加快,罹患此病的人口呈快速增长趋势,对卫生、经济和社会系统来说都是一个非常大的负担。AD的病因至今不明,发病机制复杂,西医西药治疗靶点单一,不能兼顾AD的多环节病理改变的特点,效果局限。中医中药复方具有多途径、多靶点的治疗特点,其在AD的应用研究越来越受到重视。补肾益智方是由赖世隆教授主持国家九·五攻关课题“补肾法为主治疗Alzheimer氏病的研究”实施过程中创立的中药复方,主要由蛇床子、枸杞、女贞子、人参、制首乌等多味中药组成。我科室前期的研究表明,该方可在一定程度上改善AD整体动物模型(包括东莨菪碱模型、IBO模型和卵巢切除大鼠模型)的学习记忆行为学和组织病理损伤状况,并且在体外实验中发现其含药血清对AD细胞模型也有一定的保护作用。为了更好的将本方推广和开发,本科室对补肾益智方进行了进一步的提取。在细胞实验中,发现众多提取部位中的三号药(即该方乙醇提取物的乙酸乙酯萃取部位)可促进细胞增殖,减少细胞培养上清液中LDH的漏出率,明显下调细胞Aβ1 42的表达,减少APP、PS1蛋白的表达。在此基础上,我们开展了补肾益智方及其提取部位对快速老化小鼠(SAMP8)模型影响的实验研究。目的:探讨补肾益智方(BSYZF)及其有效提取部位三号药(BSYZ-E)对SAMP8的学习记忆能力及神经炎症的改善作用,期望能找到治疗AD的理想方法,为该方的进一步开发及临床用药提供更可靠的实验依据。本次实验重点在于研究补肾益智方有效提取部位三号药能否通过减轻神经炎症反应来改善老年性痴呆的症状及病理改变。方法:6月龄雄性快速老化小鼠(SAMP8)随机分为AD模型组、安理申阳性对照药组、BSYZF低剂量组、BSYZF中剂量组、BSYZF高剂量组;BSYZ-E低剂量组、BSYZ-E高剂量组;同月龄雄性抗快速老化小鼠(SAMR1)作为正常对照组;各组小鼠给予相应药液灌服,灌胃4周后,通过Morris水迷宫实验、避暗实验测试各组小鼠学习记忆能力,免疫组织化学染色方法检测小鼠脑组织PPAR-γ和COX-2的表达水平;western-blot法检测大脑皮质内PPAR-γ、TNF-α、NF-κ B和i-NOS蛋白表达水平;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测皮质IL-1 β和IL-6的水平。实验结果数据采用均数(Mean)±标准误(SE)和均数(Mean)±标准差(SD)表示,统计学计算使用SPSS17.0统计软件包协助完成,所有计量资料均采用方差分析,组间两两比较用LSD法。结果:(1)行为学测试包括Morris水迷宫和避暗实验①Morris水迷宫行为学结果在BSYZF治疗SAMP8的实验中,与正常组比较,定位航行测试中模型组小鼠的逃避潜伏期显著延长(P<0.01),空间探索原平台象限停留时间显著减少(P<0.01);与模型组比较,安理申组和BSYZF低剂量组定位航行测试中逃避潜伏期均显著缩短(P<0.05);BSYZF低剂量组的空间探索原平台象限停留时间显著延长(P<0.05)。在BSYZ-E治疗SAMP8的实验中,与正常组比较,模型组小鼠在定位航行测试中的逃避潜伏期显著延长(P<0.01),空间探索原平台象限停留时间明显减少(P<0.01),穿越平台次数显著减少(P<0.05);与模型组比较,BSYZ-E低剂量组和高剂量组定位航行测试中逃避潜伏期均显著缩短(P<0.01,P<0.01),空间探索原平台象限停留时间均明显延长(P<0.01,P<0.05)。②避暗实验结果在BSYZF治疗SAMP8的实验中,各组之间均无统计学差异。在BSYZ-E治疗SAMP8的实验中,与正常组比较,模型组小鼠的步入潜伏期显著缩短(P<0.01),错误次数也显著增多(P<0.01);与模型组比较,BSYZ-E高剂量组的步入潜伏期显著延长(P<0.05),BSYZ-E低剂量组和BSYZ-E高剂量组的错误次数均显著减少(P<0.05,P<0.01)。(2)免疫组化学染色法检测皮质及海马PPAR-γ及COX-2的表达水平免疫组化的结果显示BSYZ-E可以增加皮质及海马中PPAR-γ的表达,减少皮质及海马中COX-2的表达。与正常组比较,模型组SAMP8小鼠皮质和海马PPAR-γ 阳性颗粒稀疏,面积较小,阳性反应强度和阳性面积百分比都显著降低(P<0.05,P<0.01);与模型组比较,BSYZ-E组PPAR-γ阳性颗粒数量多,面积大,阳性面积在皮质和海马均显著增加(P<0.01)。与正常组比较,模型组SAMP8小鼠皮质和海马COX-2阳性颗粒数量较多,面积大,染色深,阳性反应强度和阳性面积百分比都显著增加(P<0.01);与模型组比较,BSYZ-E组COX-2阳性颗粒数量阳性面积显著降低(P<0.01)。(3)western-blot 法检测皮质 PPAR-γ、TNF-α、NF-κ B 及 iNOS 蛋白表达水平Western blot实验结果显示,BSYZ-E可以增加SAMP8小鼠皮质中的PPAR-γ表达,降低皮质中TNF-α、NF-κB及iNOS的含量。与正常组相比,模型组PPAR-γ的表达明显减少(P<0.01),与模型组相比,BSYZ-E低剂量组和高剂量组均可以提高PPAR-γ的表达(P<0.01,P<0.05);与正常组比较,模型组TNF-α的表达比正常组明显增多(P<0.01),与模型组比较,BSYZ-E低剂量组和高剂量组的TNF-α表达均明显减少(P<0.05,P<0.01);与正常组相比,模型组NFκB表达比正常组明显增多(P<0.05),与模型组比较,BSYZ-E高剂量组的NFκB表达明显减少(P<0.05);与正常组比较,模型组iNOS表达比正常组明显增多(P<0.01);与模型组比较,BSYZ-E组iNOS表达均明显减少(P<0.01)。(4)ELISA法检测皮层的IL-1 β及IL-6表达水平ELISA试剂盒检测显示BSYZ-E可以明显降低SAMP8小鼠大脑皮质中IL-1 β和IL-6的含量。与正常组比较,模型组IL-1β表达比正常组明显增多(P<0.01);与模型组比较,BSYZ-E组IL-1β表达均明显减少(P<0.01);与正常组比较,模型组IL-6表达比正常组明显增多(P<0.01),与模型组比较,BSYZ-E组IL-6表达均明显减少(P<0.01)。结论:水迷宫测试和避暗实验结果提示BSYZF和BSYZ-E均可以在一定程度上改善SAMP8小鼠的学习记忆能力。BSYZ-E可以通过提高皮质及海马中PPAR-γ的表达,降低TNF-α、NF-κ B、iNOS、IL-1 β、IL-6的含量,进而改善SAM小鼠的学习记忆能力。BSYZ-E改善小鼠学习障碍的作用机制可能与其上调PPAR-γ的表达水平,减少炎症水平机制有关。从实验结果中可以发现BSYZ-E对老年痴呆有一定的治疗作用,值得进一步深入研究。