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神经营养因子是一类能够促进神经细胞存活、生长和分化的蛋白质或多肽,在神经系统的发育、生长和损伤后修复等过程中发挥重要作用.它们通过与相应的受体或受体复合物结合进行信号转导,发挥其生物学效应.胶质细胞源性神经营养因子(Glial cell line-derived neurotrophic factor,GDNF)是1993年Lin等首先在大鼠胶质细胞系B49培养液上清中发现的一种神经营养因子,具有特异地促进中脑多巴胺能神经元生长、分化,增强其对多巴胺摄取的生物学活性.目前实验表明:GDNF还具有很强的促进体外培养的脊髓运动神经元存活作用;损伤周围神经后局部给予GDNF具有抑制周围神经损伤诱导的运动神经元逆行性变性(retrograde degeneration)的作用,并且还能促进损伤后周围神经的再生.但是其作用只能维持2~3周,腺病毒载体携带神经营养因子基因介导的瞬时表达,治疗作用也只能维持3~5周.为了使GDNF在体内长期、稳定地表达,从而能更好地促进周围神经损伤后脊髓神经元的存活,人们用腺病毒伴随病毒(AAV)携带GDNF基因,研究rAAV-hGDNF是否能够抑制谷氨酸钠介导的体外培养的脊髓神经元死亡和新生大鼠周围神经损伤诱导的脊髓神经元死亡,并初步探讨其作用机制.该研究结果为神经退行性疾病如帕金森氏综合症(Parkinsons disease,PD)、肌萎缩侧索硬化(Amyotrophic lateral sclerosis,ALS)等疾病的治疗提供一定的实验依据.实验共分四部分,主要结果如下:一、GDNF在真核细胞中的表达及活性研究;在该实验中,人们提取人胎脑组织中总RNA,用RT-PCR的方法扩增出一段包含编码信号肽和前原蛋白(pro-preprotein)在内的全长约为558bp的DNA片段.二、pSNAV-hGDNF载构建、rAAV-hGDNF病毒包装及滴度的测定;该部分研究实验依据是:rHSV-rc病毒可以辅助AAV病毒的包装,并且能为AAV的包装提供反式作用基因rep和cap.用该种rHSV-rc病毒感染AAV载体转染的细胞,就会包装出重组的AAV病毒颗粒.三、rAAV-hGDNF对原代培养大鼠胚胎脊髓神经元的活性;人们发现用rAAV-hGDNF感染原代培养的脊髓神经元可以显著抑制谷氨酸钠诱导脊髓神经元的死亡.同时他们运用半定量RT-PCR的方法,以β-acrin为内对照,检测脊髓神经元内NOS mRNA的表达.四、rAAV-hGDNF对新生大鼠运动神经元的保护作用.