柯萨奇病毒A组16型（CA16）可引起全球范围内的婴儿和学龄前儿童手足口病的暴发流行,至今还没有十分有效的疫苗或抗病毒药物用于防治CA16相关疾病,同时其基因型多且复杂也给CA16临床诊断和检测带来了挑战。本论文致力于制备抗CA16 VP1单克隆抗体,不仅为研发预防性或治疗性抗CA16病毒药物奠定基础,而且为建立CA16特异性检测方法提供重要依据。本文通过优化ELISA实验中每个步骤的反应条件,包括CA16病毒抗原和待测血清稀释浓度、ELISA封闭液的种类及浓度、封闭温度和时间、HRP酶标二抗的反应时间、H₂O₂底物溶液的反应时间,为CA16 VP1特异性单抗制备建立了有效的ELISA抗体检测方法。利用pGEX-CA16-VP1重组蛋白抗原免疫小鼠及杂交瘤技术制备CA16 VP1单克隆抗体,最终获得3株理想的单克隆细胞株:CA16 VP1-1A4、CA16 VP1-1C8、CA16 VP1-4E3。通过RT-nPCR获得891bp CA16 VP1基因全长并测序成功,同时利用生物信息学软件对其抗原表位及其他生物学特性进行分析,EMBOSS结合Protean预测CA16 VP1 B细胞抗原表位共有11个,SYFPEITHI预测KMTDPPAQV,RVYMRIKHV,NLIETRCVL,MMGTFSIRT,WQTATNPSV,FDAEFTFVV这六条多肽为CA16 VP1 MHC的优选抗原表位。本试验利用凝胶层析法纯化自制的CA16 VP1单克隆抗体并标记荧光素,经ELISA方法测定效价达到1.28×10⁴,荧光单抗纯化状态较好。同时按照梯度稀释的方法,确定1:32作为荧光抗体最佳稀释比。通过直接免疫荧光法,验证荧光单克隆抗体不与EV71和CB3发生交叉反应,说明其具有很好的特异性。试验结果显示,本研究建立的间接ELISA方法能够有效地检测CA16 VP1抗体,制备的CA16 VP1单克隆抗体质量良好,效价较高而且具有明显的特异性,可以应用于病毒的快速检测及分离鉴定。