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猪血凝性脑脊髓炎(Porcine hemagglutinating encephalomyelitis,PHE)是仔猪的一种急性、高度接触性传染病,其病原是猪血凝性脑脊髓炎病毒(Porcine hemagglutinating encephalomyelitis virus,PHEV),主要感染1~3周龄的哺乳仔猪,主要以呕吐衰竭和明显的神经症状为特征。转录激活因子3(activating transcription factor 3,ATF3)是转录因子ATF/CREB家族成员之一,ATF3是一个适应反应基因,在静息细胞中低表达,在受到刺激时表达量会迅速升高。前期mRNA芯片分析结果表明,小鼠大脑及小鼠神经胶质瘤细胞(N2a)感染PHEV后,ATF3均呈现高表达。但ATF3高表达的机制及其对神经细胞的影响尚不清楚。本实验首先对N2a细胞感染PHEV后不同时间段的ATF3表达水平进行了检测,同时对不同滴度PHEV感染N2a细胞后的ATF3表达水平进行了检测,以分析病毒载量与ATF3表达水平之间的关系;其次,合成ATF3siRNA,构建ATF3过表达载体,分别转染N2a细胞,建立稳定表达的细胞系,然后接种PHEV,分析PHEV的mRNA的表达水平,并检测细胞周期和细胞凋亡,以探究ATF3是否影响病毒的复制,探究在PHEV感染神经细胞过程中ATF3对宿主细胞发挥的作用。本试验在探究PHEV感染神经细胞的机制中选择N2a细胞作为模型,根据试验内容和试验目的将N2a细胞接种于六孔板进行分组培养,将PHEV吸附N2a细胞1 h后,通过RT-PCR和Western Blot方法,于感染后2 h、12 h、24 h,检测神经细胞内ATF3表达水平的变化。N2a细胞转染siRNA和表达载体后接种PHEV,设置5组:对照组、ATF3干扰接毒组、阴性对照接毒组、ATF3过表达接毒组、空载接毒组,每组3个重复,利用RT-PCR技术检测PHEV mRNA表达情况,探究ATF3是否影响病毒的复制;通过Annexin V-FITC/PI双染法检测12 h细胞凋亡,利用PI单染法检测12 h细胞周期,以测定ATF3对PHEV感染的神经细胞的凋亡和细胞周期的影响。结果表明,ATF3在正常N2a细胞中表达水平较低,随着感染时间的增加,PHEV mRNA表达量和ATF3 mRNA表达量均出现先升高后降低的趋势,二者之间呈正相关;随着感染时间的增加ATF3的蛋白表达量持续升高;随着病毒滴度的降低,ATF3表达量也随之下降转染了ATF3siRNA后,ATF3表达显著受到抑制;转染了ATF3过表达载体后,ATF3表达显著升高。利用RT-PCR技术检测PHEV mRNA表达水平,利用流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期,结果发现,ATF3干扰接毒组细胞与阴性对照接毒组相比,PHEV mRNA表达量无明显差异;早期凋亡升高;G1期阻滞加重。ATF3过表达接毒组细胞与空载接毒组细胞相比,早期凋亡率下降;S期阻滞减缓。综上所述,ATF3在PHEV感染N2a细胞的过程中与病毒的复制呈正相关,PHEV会影响ATF3的表达,但ATF3并不会影响PHEV的复制,ATF3在PHEV感染N2a细胞的过程中会起到抗凋亡和促进细胞周期的作用。