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背景:乳腺癌是一种威胁女性健康的常见恶性肿瘤,且其发病率逐年上升。目前针对乳腺癌的综合诊治获得了巨大的成功,但仍然有一部分乳腺癌对于治疗是不敏感的;三阴性乳腺癌异质性强、恶性程度高又缺乏HR受体及有效靶点只能依靠细胞毒性药物来进行治疗,是治疗效果较差的一种乳腺癌亚型;因此,寻找疗效好、副作用小的药物永远是乳腺癌的研究重点之一。近年来,细胞自噬机制与肿瘤的关系越来越得到重视,自噬在乳腺癌的发生、发展和治疗都发挥着重要作用。Z-古格列酮是印度草药Guggul的主要生物活性成分,我们的前期研究发现Z-古格列酮对乳腺癌细胞有一定的抑制作用,但是其确切的功效及作用机制尚未明了。本研究将以细胞自噬为切入点来研究Z-古格列酮对乳腺癌细胞系的影响及其作用机制。目的:探索Z-古格列酮(Z-Guggulsterone,Z-GS)对人三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞株增殖及自噬的影响,并探讨其可能的机制,为Z-GS应用于三阴性乳腺癌的临床治疗提供理论基础。方法:1.Z-GS对MDA-MB-231细胞生长活性的影响:不同浓度梯度的Z-GS(0、5、10、20、40μmol/L)处理人三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞株,MTT 比色法检测不同浓度Z-GS对MDA-MB-231细胞生长活性的影响,分别计算其抑制率,并根据结果作出浓度-抑制率曲线,计算半数抑制率的浓度IC50;2.Z-GS与MDA-MB-231细胞自噬:荧光显微镜观察不同浓度Z-GS(0、5、10、20、40μmol/L)作用于MDA-MB-231细胞24h后细胞胞浆内自噬体的数量变化;Western blot检测自噬相关蛋白LC3-Ⅱ的表达;3.Z-GS影响MDA-MB-231细胞自噬的机制:Western blot检测不同浓度Z-GS(0、5、10、20、40μmol/L)作用于 MDA-MB-231 细胞 24h 后 AMPK-mTOR 信号通路相关蛋白p-AMPK、p-mTOR的表达;使用AMPK抑制剂Compound C与Z-GS共同作用于MDA-MB-231细胞,荧光显微镜下观察自噬体的变化,Western blot检测p-AMPK表达情况的变化。结果1.Z-GS抑制MDA-MB-231细胞增殖:MTT结果表明,Z-GS抑制MDA-MB-231细胞的生长活性,且呈浓度依赖性。Z-GS作用于MDA-MB-231细胞24h时,IC50(半数抑制浓度)为35.36μmol/L。2.Z-GS诱导乳腺癌MDA-MB-231细胞发生自噬:荧光显微镜下示踪自噬形成实验显示,Z-GS作用于MDA-MB-231细胞后,荧光斑点呈浓度依赖性增加,提示自噬体增多;Z-GS与AMPK抑制剂Compound C联合使用后,荧光斑点较Z-GS单独使用减少,提示自噬体数量减少。Western blot结果显示:当Z-GS作用于MDA-MB-231 细胞 24h 后,自噬相关蛋白 LC3-Ⅱ 表达增加,且其增加程度呈浓度依赖性。以上实验提示Z-GS可以诱导乳腺癌MDA-MB-231细胞发生自噬,且该作用可以被AMPK抑制剂Compound C逆转。3.Z-GS可能通过AMPK-mTOR通路诱导乳腺癌MDA-MB-231细胞发生自噬:Western blot检测结果显示,当Z-GS作用于MDA-MB-231细胞24h后,p-AMPK表达增加、p-mTOR表达降低,且作用效果呈浓度依赖性;将Z-GS与AMPK抑制剂Compound C联合使用后,p-AMPK表达量较Compound C组稍有增加,较Z-GS组明显降低。结论1.Z-GS可以通过诱导MDA-MB-231细胞发生自噬抑制其生长。2.Z-GS可能通过AMPK-mTOR通路诱导细胞发生自噬。