【摘 要】
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研究目的:阿霉素良好的抗癌效果使其在临床上获得广泛运用,而阿霉素对心脏的慢性毒性使得阿霉素化疗病人都处于阿霉素慢性心肌病的威胁之下。研究阿霉素对小鼠心脏慢性毒性损伤的特点和作用机制,可以为法医工作中的阿霉素慢性毒性致死案件提供鉴定依据,并进一步提高药物中毒案件的鉴定能力。研究方法:1.建立阿霉素慢性心脏毒性小鼠模型:给小鼠腹腔注射阿霉素,2周内给药6次,每次剂量为2.5mg/kg,累计剂量15mg
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研究目的:阿霉素良好的抗癌效果使其在临床上获得广泛运用,而阿霉素对心脏的慢性毒性使得阿霉素化疗病人都处于阿霉素慢性心肌病的威胁之下。研究阿霉素对小鼠心脏慢性毒性损伤的特点和作用机制,可以为法医工作中的阿霉素慢性毒性致死案件提供鉴定依据,并进一步提高药物中毒案件的鉴定能力。研究方法:1.建立阿霉素慢性心脏毒性小鼠模型:给小鼠腹腔注射阿霉素,2周内给药6次,每次剂量为2.5mg/kg,累计剂量15mg/kg,给药结束后正常饲喂4周。检查小鼠心功能,确定模型是否建立成功。2.采集小鼠的生理指标:建模期间每2天称量并记录小鼠的体重信息,处死小鼠、分离小鼠的心脏,然后用分析天平称量小鼠心脏的重量。3.检测小鼠心功能:使用小动物超声检测仪检测小鼠心脏的射血分数、短轴缩短率和E峰/A峰比值。4.检测小鼠心肌酶水平:使用ELISA试剂盒检测血清中肌酸激酶同工酶MB的含量。5.测量小鼠心肌细胞的横截面积:用小麦胚芽凝集素-Hoechst 33342对细胞膜与细胞核进行染色,使用Image J软件测量心肌细胞的横截面积。6.检测小鼠心肌组织的胶原沉积面积:用天狼猩红饱和苦味酸染液对心肌组织石蜡切片进行染色,使用Image PRO-60软件统计红色胶原在组织切片中的面积比例。7.检测小鼠心肌组织中坏死细胞比例:给小鼠尾静脉注射伊文思蓝染液,摘下心脏通过主动脉倒灌洗掉多余染液后做冰冻切片,用Hoechst 33342染细胞核。将细胞核与红色荧光照片融合,确定坏死细胞在心肌组织中所占比例。8.检测小鼠心肌组织氧化应激产物:使用化学发光的方法检测心肌组织中活性氧的生成量;根据丙二醛与硫代巴比妥酸的显色反应检测心肌组织中脂质过氧化产物丙二醛的含量。9.检测心脏中炎性因子的表达量:提取心肌组织的总RNA,逆转录合成cDNA后进行扩增,通过荧光定量PCR检测TNF-α、IL-1β和IL-6在RNA水平上的表达量。10.检测心脏中铁死亡水平:使用铁离子检测试剂盒检测心肌组织中铁离子含量;提取心肌组织的总蛋白,通过Western Blot检测谷胱甘肽过氧化物酶4的蛋白表达量。研究结果:1.与对照组小鼠相比,阿霉素慢性心脏毒性造成小鼠心脏舒张功能下降,收缩功能明显受损;阿霉素处理组小鼠心功能下降,与临床患者表现一致,说明小剂量给药2周后停药4周的给药方法,可成功建立阿霉素慢性心脏毒性模型。2.阿霉素慢性心脏毒性导致小鼠心肌酶水平升高,并发生以下病理改变:心肌细胞肥大、心肌肥厚、纤维化增生、心肌细胞坏死。3.氧化应激、炎症反应、铁死亡在阿霉素对心脏的慢性毒性损伤中协同作用。研究结论:阿霉素对心脏慢性毒性的损伤特点:①心功能下降,以收缩功能受损为主;②心肌酶水平升高;③出现心肌肥厚,表现为心肌细胞肥大且心重/体重的比值上升;④心肌纤维化增加;⑤心肌细胞坏死比例上升。阿霉素慢性心脏毒性的损伤机制探索:阿霉素慢性心脏毒性反应中炎症反应、氧化应激、铁死亡多因素协同作用,对心肌造成损伤,其中氧化应激作用程度弱于急性心脏毒性模型。
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