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目的:研究苏茵解毒方（Suyin detoxification prescription,SDP）的临床疗效并通过体内外实验进一步分析其药理作用机制。第一部分:回顾性队列研究比较苏茵解毒方与传统辨证方治疗慢性肾脏病（Chronic Kidney Disease,CKD）3～5期肾虚湿浊证非透析患者的临床疗效。第二部分:观察苏茵解毒颗粒（Suyin detoxification granule,SDG）对腺嘌呤诱导的大鼠尿蛋白、肾功能、肾组织纤维化和炎症指标的影响。第三部分:通过体外实验分析苏茵解毒方在白蛋白诱导的肾小管上皮细胞线粒体功能障碍、细胞焦亡和上皮间质转化（Epithelial-mesenchymal transition,EMT）的影响,进一步阐释其分子机制。方法:第一部分临床研究:基于东华门诊系统,按纳排标准筛选2017年10月～2020年10月江苏省中医院肾内科门诊部使用SDP加减方和中医传统辨证方治疗CKD3～5期肾虚湿浊证非透析的患者,按其治疗方法的不同分为对照组（传统辨证方组）和治疗组（SDP组）,收集患者的基线资料。治疗6个月后对患者进行随访,再次记录患者的临床资料,观察尿蛋白、血清白蛋白、血尿素氮、血肌酐、血尿酸和肾小球滤过率的变化,统计终点事件的发生率,评估两组治疗的总有效率。第二部分动物实验:腺嘌呤灌胃建立腺嘌呤肾衰大鼠模型,实验分为空白组（生理盐水灌胃）、腺嘌呤组（2.5%腺嘌呤以200mg/kg/d连续灌胃一个月后,继续维持相同剂量隔日灌胃1个月）、SDG低剂量组（腺嘌呤模型+SDG 5g/kg/d连续灌胃2个月）、SDG高剂量组（腺嘌呤模型+SDG 10g/kg/d连续灌胃2个月）。记录大鼠精神状态,体重和肾重,实验结束处死大鼠后,H＆E、Masson和PAS染色观察大鼠肾脏病理,血尿素氮、血肌酐、血尿酸、血胱抑素C评价肾功能,尿蛋白排泄率和血白蛋白评估尿蛋白的变化,免疫组化检测肾纤维化指标（Collagen Ⅰ 和 Fibronectin）,Elisa 检测血 IL-1、IL-1β、IL-18、MCP-1评估全身炎症情况,免疫组化检测肾脏炎症相关指标（NLRP3、Caspase-1、Gasdermin-D、IL-1β）。第三部分细胞实验:白蛋白刺激HK-2细胞建立损伤模型,利用CCK-8检测细胞活性,细胞划痕实验检测细胞迁移能力等筛选出SDP最佳浓度干预细胞模型。使用NLRP3抑制剂CY-09和SDP分别干预白蛋白损伤模型,利用Western Blotting实验检测EMT相关指标Fibronectin、Collagen Ⅰ、Vimentin、E-cadherin 蛋白的表达,和 NLRP3/ASC/Caspase-1/Gasdermin-D/IL-1β细胞焦亡通路的蛋白表达。检测细胞活性氧（ROS）的释放、ATP生成量、超氧化物歧化酶（SOD）的含量和线粒体膜电位的变化来评估SDP对白蛋白诱导的细胞线粒体功能障碍的影响。利用线粒体抗病毒蛋白（Mitochondrial Antiviral Signaling Protein,MAVS）的Si RNA瞬时转染HK-2细胞对MAVS基因敲减,Western Blotting检测Si MAVS敲减后对白蛋白诱导的细胞NLRP3蛋白的表达。利用RT-PCR检测SDP、CY-09、Si MAVS分别干预白蛋白模型后,对MAVS和NLRP3的mRNA含量产生的变化。免疫荧光技术检测MAVS和线粒体荧光探针的定位表达,进一步检测SDP、CY-09、Si MAVS分别干预后对白蛋白诱导的MAVS和NLRP3的定位和荧光定量表达。利用流式实验Annexin V/FITC双通道检测SDP、CY-09、SiMAVS对细胞焦亡的影响。结果:第一部分临床研究:对照组（117例）和治疗组（105例）基线资料齐,具有可比性。对治疗6个月后的两组患者进行随访,统计后得出,治疗组较对照组的尿蛋白减轻（P=0.004）,但血清白蛋白变化不明显,对照组为40.79±5.47g/L,治疗组为40.04±5.50g/L（P=0.280）。治疗方组较对照组的血尿素氮下降明显,分为为11.86±5.64mmol/L和12.50±6.71（P＞0.026）;治疗组与对照组相比血肌酐降低明显,分别为178.78士125.15和217.62±162.17μmol/L（P=0.029）;两组血尿酸比较无统计学意义（P=0.099）,分别为437.52±105.67和425.97±91.94μmol/L;两组eGFR相比,治疗组较对照组增长明显,两组分为为47.41±26.49和40.97±22.29 ml/min/1.73m2（P=0.039）。最后以Scr估计总有效率,治疗组总有效率为74.29%,对照组为60.68%,两者相比具有统计学意义（P=0.031）。终点事件的发生率治疗组为2.86%,对照组为5.13%,两者相比无统计学意义（P=0.392）。第二部分动物实验:SDG可以减轻腺嘌呤诱导的大鼠肾重增加、体重减轻、肾脏纤维化指标Fibronectin和Collagen Ⅰ的表达,改善了肾脏纤维化和炎症浸润病理结果。同时,SDG降低了血尿素氮、血尿酸、血肌酐、血胱抑素C,降低了尿蛋白排泄率,增加了血清白蛋白含量。其次,血清炎症指标IL-1、IL-1β、IL-18和MCP-1在SDG的干预下也有所降低。最后,SDG减轻了腺嘌呤大鼠肾脏的NLRP3、Caspase-1、Gasdermin-D和IL-1β的表达。第三部分细胞实验:SDP和CY-09干预白蛋白模型后,细胞活性升高,细胞迁移能力降低,细胞形态从长梭形趋向正常,Fibronectin、Collagen Ⅰ、Vimentin蛋白表达降低,E-cadherin蛋白表达升高,NLRP3、ASC、活化的Caspase-1、活化的Gasdermin-D和成熟的IL-1β蛋白表达降低。同时,SDP可以改善细胞线粒体功能障碍,具体表现在ROS释放减少,SOD和ATP含量升高,线粒体膜电位趋于正常。敲减MAVS基因后,不仅MAVS蛋白表达降低,NLRP3的蛋白表达也有所降低,同样在白蛋白模型上,Si MAVS干预后MAVS和NLRP3的表达均有所降低。SDP、CY-09和Si MAVS分别干预白蛋白模型后,NLRP3和MAVS的mRNA含量降低。免疫荧光发现MAVS与线粒体共定位。白蛋白模型下,NLRP3和MAVS的共定位增强,且荧光表达强度高,在SDP、CY-09和Si MAVS的分别干预后,它们的共定位减弱,荧光表达强度降低。最后,通过流式检测,SDP、CY-09和Si MAVS都能减轻白蛋白诱导的细胞焦亡。结论:①SDP治疗CKD3～5期肾虚湿浊证非透析患者,可以减少尿蛋白,改善肾功能,提高肾小球滤过率。②SDG可以缓解腺嘌呤诱导的大鼠肾功能不全、过量尿蛋白,肾纤维化和炎症反应。③SDP调节线粒体功能障碍/MAVS/NLRP3-ASC-caspase-1炎症通路减轻白蛋白诱导肾小管上皮细胞焦亡和EMT。