【摘 要】
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皂苷是一类两性植物苷类化合物,在食品、农业、医疗等方面均有广泛应用。皂树皂苷(Quil A)是从南美皂树中分离得到的一种三萜皂苷,作为最为有效的皂苷类免疫佐剂成分,被广泛研究,并被证实是唯一能够既产生Th1型细胞免疫应答,又能诱导机体产生细胞毒性T淋巴细胞(CTL)的免疫佐剂。但由于其具有异质性、不稳定性、溶血活性和一定的毒副作用,所以需要与递送剂构成佐剂系统或寻找其它替代成分。本研究以多种皂苷类
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皂苷是一类两性植物苷类化合物,在食品、农业、医疗等方面均有广泛应用。皂树皂苷(Quil A)是从南美皂树中分离得到的一种三萜皂苷,作为最为有效的皂苷类免疫佐剂成分,被广泛研究,并被证实是唯一能够既产生Th1型细胞免疫应答,又能诱导机体产生细胞毒性T淋巴细胞(CTL)的免疫佐剂。但由于其具有异质性、不稳定性、溶血活性和一定的毒副作用,所以需要与递送剂构成佐剂系统或寻找其它替代成分。本研究以多种皂苷类化合物作为可能的免疫佐剂成分,并以羟丙基-β-环糊精(HP-β-CD)和卵磷脂与胆固醇组成的递送系统(delivery system)作为递送剂,优化皂苷类免疫佐剂并初步研究其免疫效应。实验以卵清蛋白(OVA)为抗原,组合不同皂苷类化合物与递送剂作为优化的免疫佐剂并进行小鼠实验,其中,OVA免疫组为对照,PBS组为空白对照,研究免疫后的体液免疫与细胞免疫。通过ELISA检测免疫后抗体水平的结果表明,HP-β-CD与Quil A构成的免疫系统,能够刺激机体产生高水平抗体,OVA特异性IgG、IgG1和IgG2a分别约是Quil A单独免疫的2倍、2倍和1.3倍,较OVA免疫组的抗体水平差异极显著(P<0.01),说明HP-β-CD能够保持并增强Quil A的佐剂活性与特性。Tet和Cel均体现出良好的佐剂活性,其中,Cel与Del递送剂联用免疫效果更好。两种皂苷类成分均能显著提高抗原特异性IgG和IgG1,Cel单独使用能够显著提高抗原特异性IgG2a。通过MTT法检测淋巴细胞增殖情况可以看出Tet、Cel、HP-β-CD和卵磷脂、胆固醇组成的递送剂均可以促进Con A诱导受免小鼠淋巴细胞的增殖反应,说明递送系统可以显著增强受免小鼠的细胞免疫应答反应。通过流式细胞术检测受免小鼠脾脏淋巴细胞数量变化。结果发现,Tet和Cel均能够提高CD19+淋巴细胞数量;佐剂与递送剂构成的递送系统免疫后,CD4+细胞数量减少,较OVA免疫组相比差异极显著(P<0.01),而CD19+细胞数量基本不变,说明HP-β-CD和卵磷脂胆固醇均可能促进CD4+向外周淋巴组织的迁移,进而介导抗体反应加强。通过荧光定量PCR的结果可以检测发现,当具有佐剂活性的皂苷作用于机体时,BCL6基因表达上调;当具有佐剂活性的皂苷与del递送剂联用时,BCL6基因表达下调,提示皂苷单独或与del递送剂发挥免疫佐剂作用时与BCL6的表达具有相关性。以上实验结果为选择合适的皂苷化合物作为有效的免疫佐剂成分奠定基础,并为HP-β-CD作为皂苷类佐剂递送剂的效应与效果奠定了一定的研究基础,为皂苷类免疫佐剂的广泛应用提供新的思路。
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