【摘 要】
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安石榴苷是石榴皮多酚类化合物中不可缺少的成分,其具有高效的抗肿瘤作用。为了深入探讨石榴皮多酚(Pomegranatepeel polyphenols,PPP)抗肿瘤作用的相关机制,本研究选择石榴皮多酚提取物(采用HPLC法测定安石榴苷含量为82.7%)作为供试物,观察药物对人前列腺癌PC3细胞(PC3细胞)的增殖抑制作用,并对于凋亡与线粒体、凋亡与自噬之间的关系进行初步探讨。本课题研究为石榴皮多酚
【基金项目】
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新疆维吾尔自治区自然科学基金面上项目“基于线粒体介导维药石榴皮多酚诱导前列腺癌细胞自噬性死亡的作用研究”的研究成果(项目编号:2017D01C373),课题主持人:刘盟副主任药师(新疆医科大学附属肿瘤医院);
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安石榴苷是石榴皮多酚类化合物中不可缺少的成分,其具有高效的抗肿瘤作用。为了深入探讨石榴皮多酚(Pomegranatepeel polyphenols,PPP)抗肿瘤作用的相关机制,本研究选择石榴皮多酚提取物(采用HPLC法测定安石榴苷含量为82.7%)作为供试物,观察药物对人前列腺癌PC3细胞(PC3细胞)的增殖抑制作用,并对于凋亡与线粒体、凋亡与自噬之间的关系进行初步探讨。本课题研究为石榴皮多酚抗肿瘤的机制奠定了基础,对其药用价值及前列腺癌的治疗具有重要意义。研究结论如下:(1)观察石榴皮多酚对PC3细胞的增殖活性以及周期分布情况。研究表明:①在增殖活性研究中,不同浓度组石榴皮多酚(25、50、100、150及200 μg/mL)干预PC3细胞24 h、48 h和72 h后,200 μg/mL组石榴皮多酚的细胞抑制率可达62.06%、86.65%和88.39%;在药物作用时间为48 h时细胞IC50为110 μg/mL。因此,选取药物最佳作用时间48 h,石榴皮多酚浓度为50、100和200 μg/mL为试验组检测其凋亡机制。②观察PC3细胞周期的分布状态,表明石榴皮多酚主要影响了 PC3细胞的晚期凋亡,并且高浓度组(200 μg/mL)的石榴皮多酚凋亡率达23.6%,与对照组(0.4%)相比,有显著性差异(P<0.05)。③石榴皮多酚作用于PC3细胞48 h后,200 μg/mL 的试验试组G0/G1期细胞数为82.680%±2.093,显著高于对照组(75.895%±0.869),数据有统计学意义(P<0.05)。(2)通过ATP检测试剂盒法检测在不同浓度石榴皮多酚(50、100和200μg/mL)干预过程中,PC3细胞内ATP含量的变化。本试验发现200μg/mL石榴皮多酚组干预细胞后细胞内ATP含量为1.120±0.193μmol/L,与空白对照组(2.048±0.130 μmol/L)相比,数据有显著性差异(P<0.05)。(3)使用Wcstern-blot方法检测不同浓度石榴皮多酚(50、100和200 μg/mL)对PC3细胞凋亡蛋白Bax和Bcl-2的表达水平以及自噬相关蛋白表达的影响。结果表明,石榴皮多酚干预前列腺癌48 h后,石榴皮多酚能够显著上调Bax蛋白的表达水平,与此同时能明显下调Bcl-2基因的表达(P<0.05)。在石榴皮多酚药液(50、100和200μg/mL)对PC3细胞自噬相关研究中,结果提示,石榴皮多酚可以有效增加自噬相关系列蛋白LC3、Beclin-1、Atg7、Atg5、Atg12及Atg16的表达水平,并能显著降低P62基因的表达。综上所述,石榴皮多酚可有效抑制前列腺癌PC3细胞,具有明显的抗肿瘤作用,其作用机制可能与自噬相关。
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