第一部分肝内胆管结石合并胆管狭窄增生患者临床病理特征及可能发生机制的研究目的:通过研究肝内胆管结石患者的胆管炎和胆管狭窄局部微环境的变化,探讨肝内胆管结石后发生胆管狭窄过程中可能的参与机制。方法:收集肝内胆管结石伴胆管狭窄患者标本40例,作为狭窄增生组;同时收集因肝内胆管结石仅伴胆管炎症行肝切除术患者标本30例,作为炎症组。取同期因肝脏损伤行肝脏切除术患者肝组织标本20例,作为正常组。采用HE染色、Masson染色和免疫组化等技术分别检测标本成纤维细胞分布密度、炎症细胞浸润分级、胶原纤维增生情况、组织Survivin、TGF-β1、Caspase-3的阳性表达情况。结果:1、本组共纳入360例患者,全组患者入院时有腹痛不适189例,其中伴发热56例、黄疸87例、Charcot三联征34例。其中74例有既往胆道手术史,既往有1次胆道手术史患者共52例,既往有2次胆道手术史患者共22例。胆管狭窄患者共计76例,在收集的病例中占21.11%。肝内胆管结石位于肝右叶患者共计40例,肝内胆管结石位于肝左叶患者共计105例、胆管结石位于双侧肝叶患者共计9例,肝内胆管结石合并肝外胆管结石患者共计206例。在纳入研究的360例患者中,行肝脏切除术患者228例,术后并发胆道感染19例,结石残余8例,结石复发11例,发生胆漏14例。2、狭窄增生组与炎症组病理比较:炎症组病理标本镜下可见部分胆管壁出现纤维化并开始增厚,部分胆管粘膜出现受损,少量胶原纤维增生,方向紊乱。在镜下视野下可见大量炎细胞广泛的浸润,炎细胞中主要包括淋巴细胞、极少中性粒细胞及单核细胞等,以粘膜下层、胆管壁腺体周围为主。狭窄增生组镜下可见胆管管壁纤维化严重,部分胆管壁增厚,厚薄不均,方向紊乱,可见增生的散乱胶原纤维。还可见密度增加的成纤维细胞,细胞核肥大,胆管黏膜上皮开始出现受损脱落,伴随广泛浸润的炎细胞,主要为大量淋巴细胞、少量中性粒细胞及单核细胞等。3、TGF-β1在以上三组中阳性表达率分别为狭窄增生组52.50%、炎症组30.00%、正常组5.0%,各组间差异均有统计学意义(P<0.01);Survivin在以上三组中阳性表达率分别为狭窄增生组65.00%、炎症组36.67%、正常组10.00%,狭窄增生组与炎症组,狭窄增生组与正常组,差异均有统计学意义(P<0.01),但炎症组与正常组无统计学差异(P>0.05);Caspase-3在以上三组中阳性表达率分别为狭窄增生组32.50%、炎症组56.67%、正常组95.00%,各组间差异均有统计学意义(P<0.01)。结论:1.本实验通过肝胆管组织HE染色、Masson染色、免疫组化染色等方法发现肝内胆管结石合并的胆管炎和胆管狭窄增生之间微环境成分不同:炎症组可见部分胆管壁出现纤维化并开始增厚,部分胆管粘膜出现受损,少量胶原纤维增生,方向紊乱。在镜下视野下可见大量炎细胞广泛的浸润,炎细胞中主要包括淋巴细胞、极少中性粒细胞及单核细胞等,以粘膜下层、胆管壁腺体周围为主。狭窄增生组可见胆管管壁纤维化严重,部分胆管壁增厚,厚薄不均,方向紊乱,可见增生的散乱胶原纤维。还可见密度增加的成纤维细胞,细胞核肥大,胆管黏膜上皮开始出现受损脱落,伴随广泛浸润的炎细胞,主要为大量淋巴细胞、少量中性粒细胞及单核细胞等。2.TGF-β1、Survivin在肝内胆管狭窄增生组织中阳性表达率较高,两者呈正相关,Caspase-3在肝内胆管狭窄增生组织中阳性表达率较低,与前两者呈负相关,提示三者的表达及相互作用,可能在促进肝内胆管结石相关胆管狭窄的发生与发展起一定作用。第二部分TGF-β1、Survivin和Caspase-3在肝内胆管结石相关性肝内胆管癌中的表达及临床意义目的:通过研究肝内胆管结石合并肝内胆管癌患者肝内胆管病理改变,探讨TGF-β1、Survivin和Caspase-3三种标志物的表达与肝内胆管癌组织的相关性。方法:应用免疫组化法检测52例肝内胆管癌患者肝内胆管组织(肿瘤组)和30例肝内胆管结石仅合并慢性炎症患者肝内胆管组织(炎性增生组)及30例正常肝内胆管组织(正常组)中TGF-β1、Survivin和Caspase-3三种标志物的表达,比较每组三种标志物表达的差异,并分析三种标志物表达与肝内胆管癌患者临床病理特征和预后的关系。结果:1.收集我院病理科2008至2019年术后病理诊断为肝内胆管癌的蜡块标本共52例,归为肿瘤组。肿瘤组患者中合并肝硬化8例,Hbs Ag阳性患者15例,发生淋巴结转移患者22例,合并血管侵犯12例。单因素分析显示肝内胆管癌患者术后预后与淋巴结转移情况、肿瘤分化情况、血管侵犯、肿瘤最大直径、R0切除、CA199、AFP、TGF-β1、Survivin及Caspase-3表达等因素有关(均P<0.05);与年龄、性别、肝硬化、Hbs Ag表达等因素无关(均P>0.05)。Cox比例风险模型分析表明是否R0切除、肿瘤分化情况、TGF-β1、Survivin及Caspase-3表达等因素是肝内胆管癌患者术后生存期的不良独立预后因素。2.TGF-β1在以上三组中阳性表达率分别为肿瘤组73.08%、炎性增生组40.0%、正常组16.67%,各组间差异均有统计学意义(P<0.01)。3.Survivin在以上三组中阳性表达率分别为肿瘤组69.23%、炎性增生组43.33%、正常组16.67%,各组间差异均有统计学意义(P<0.01)。4.Caspase-3在以上三组中阳性表达率分别为肿瘤组42.31%、炎性增生组66.67%、正常组90.0%,各组间差异均有统计学意义(P<0.01)。5.肝内胆管癌患者胆管组织中TGF-β1表达与Caspase-3蛋白呈显著负相关(r=-0.890,P<0.01),与Survivin呈显著正相关(r=0.917,P<0.01),Survivin与Caspase-3呈显著负相关(r=-0.894,P<0.01)。结论:1.TGF-β1、Survivin在肝内胆管细胞癌中阳性表达率较高,两者呈正相关,Caspase-3阳性表达率较低,与前两者呈负相关,三者相互作用,共同促进肝内胆管癌的发生与发展。2.TGF-β1、Survivin和Caspase-3阳性表达情况是影响肝内胆管结石相关肝内胆管癌患者术后生存时间的独立影响因素。监测肝内胆管细胞癌组织中TGF-β1、Survivin与Caspase-3的水平,有助于判断患者的预后。