p53-VEGFR2合成致死抑制胶质瘤细胞生长的初步研究

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目的:1.初步验证p53-VEGFR2在人脑胶质瘤细胞中存在合成致死作用;2.探讨p53-VEGFR2合成致死在抑制人脑胶质瘤细胞生长中的初步作用。研究内容及方法:选取p53野生型和突变型人脑胶质瘤细胞U87和U251并培养,首先通过蛋白质印记法(Western Blotting,WB)验证两者是否为p53野生型和p53突变型细胞。设计并合成针对血管内皮细胞生长因子受体2(Vascular Endothelial Growth Factor Receptor 2,VEGFR2)的3种不同条带的siRNA,用脂质体包裹VEGFR2-siRNA并分别转染至U87和U251细胞中。每种细胞共分四组:空白对照组(blank control,BC)不转染脂质体,阴性对照组(negative control,NC)转染无义序列-siRNA,脂质体转染组(Liposome transfection,LT)转染空白脂质体,实验组(VEGFR2-siRNA transfection,VT)分别转染3种不同条带的VEGFR2-siRNA。通过Western Blotting筛选出抑制率最高的siRNA序列及该序列的最适浓度。使用空白对照组和实验组进行以下实验:1、Western blotting检测U87和U251细胞转染siRNA前后蛋白表达水平;2、CCK-8法检测细胞增殖能力;3、划痕实验检测细胞迁移性;4、Transwell小室法检测细胞侵袭能力;5、平板细胞克隆形成实验检测细胞聚集性。结果:1、转染siRNA后,U87和U251细胞VEGFR2蛋白表达均降低,U251蛋白表达水平明显低于U87。2、CCK-8检测到U87和U251细胞转染siRNA后,两者的增殖能力均减弱,U251增殖受抑制率明显高于U87。3、划痕实验结果显示U87和U251转染siRNA后迁移能力均下降,U251迁移能力下降较U87更明显。4、Transwell小室法的结果显示,转染siRNA的U87和U251细胞的侵袭能力均下降,U251侵袭能力U87相比显著下降。5、细胞平板细胞克隆形成实验结果表明,转染siRNA的U87和U251细胞的集落形成能力均下降,U251细胞转染后聚集能力明显低于U87。结论:1、p53和VEGFR2在人脑胶质瘤细胞中存在合成致死作用;2、p53-VEGFR2合成致死对人脑胶质瘤细胞的生长有明显的抑制作用。
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