环氧化物水解酶2(EPHX2)在转移性胃癌组织中的差异表达及其功能研究

来源 :福建医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:TIGERKING2009
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目的:探究环氧化物水解酶2(EPHX2)在转移性胃癌中的表达情况及其对胃癌细胞生长、迁移、侵袭的影响。方法:1.从GEO数据库获取胃癌样本表达谱数据,利用R语言Affy程序包进行数据标准化处理,Limma程序包筛选差异表达基因。2.运用Western blot、Real-time PCR以及组织芯片结合免疫组化的方法检测胃癌组织及其配对的癌旁组织中EPHX2的表达情况。3.构建EPHX2稳定过表达及沉默表达的胃癌细胞株AGS和HGC-27,并通过蛋白质印迹法(免疫印迹实验)验证EPHX2过表达及沉默的效果。4.采用细胞增殖与活性检测试剂盒(CCK-8)法、平板克隆形成实验、软琼脂集落形成实验、细胞划痕愈合实验、Transwell细胞迁移实验和Transwell细胞侵袭实验检测EPHX2过表达及沉默后对胃癌细胞AGS和HGC-27生长、迁移以及侵袭能力的影响。结果:1.在转移性胃癌样本中发现1136个差异表达基因,其中上调基因有692个,下调基因有444个。EPHX2的表达水平在胃癌转移样本中比非转移样本低。2.Western blot及Real-time PCR结果显示EPHX2的m RNA及蛋白表达水平在胃癌组织中均比癌旁正常组织低,差异具有统计学意义。此外,病理分析表明EPHX2的表达与患者年龄、淋巴结转移、临床分期、淋巴血管侵袭显著相关,其余病理变量均与EPHX2的表达无显著相关。胃癌患者生存分析的结果表明,EPHX2低表达的患者生存时间明显低于EPHX2高表达的患者。3.EPHX2过表达后,实验组胃癌细胞AGS和HGC-27在不同检测时间点的CCK-8值(OD450)、平板克隆形成实验中克隆形成的数目及大小、软琼脂集落形成实验中克隆形成率相较其相应的对照组均减少,而EPHX2沉默后,结果相较对照组增加,差异具有统计学意义。细胞划痕愈合实验中,划痕一定时间后拍照记录,EPHX2过表达组的细胞划痕区较对照组宽大,而沉默组的细胞划痕区域比对照组狭小,差异具有统计学意义。在Transwell细胞体外迁移实验、Transwell细胞体外侵袭实验中,培养一定时间后拍照记录,过表达组小室微孔膜下层细胞的数目减少,而沉默组小室微孔膜下层细胞的数目增加,差异具有统计学意义。结论:1.胃癌组织中EPHX2的m RNA和蛋白水平较癌旁组织明显降低。2.EPHX2可抑制胃癌细胞的生长增殖。3.EPHX2可抑制胃癌细胞的迁移侵袭。
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